[發明專利]一種乙型肝炎病毒RNA檢測試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202210764611.8
• 申請日: 2022-06-29
• 公開（公告）號: CN115125334A
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發明（設計）人: 蔣析文;劉悅;楊迪;董子維;鄭志東;黃婷婷
• 申請（專利權）人: 廣州達安基因股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 上海助之鑫知識產權代理有限公司 31328
• 代理人: 陳詳

本發明提供了一種乙型肝炎病毒RNA檢測試劑盒及方法，具體地，本發明基于多重實時熒光定量PCR開發了檢測乙型肝炎病毒RNA(HBV RNA)的試劑盒及方法。可廣泛應用于HBV病毒引起的乙型肝炎的臨床診斷和療效跟蹤，以及疫情防控等領域。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明涉及一種乙型肝炎病毒RNA檢測試劑盒及方法。

背景技術

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是一種嗜肝病毒，主要存在于肝細胞內并損害肝細胞，是導致慢性乙型肝炎、肝硬化、肝衰竭和肝細胞癌的主要致病因素。乙型肝炎病毒感染是全球性的公共衛生問題。全球肝硬化和肝細胞癌患者中，由HBV感染引起的比例分別為30％和45％。我國肝硬化和肝細胞癌患者中，由HBV感染引起的比例分別為60％和80％。HBV造成的疾病負擔非常沉重，其防治工作面臨嚴峻的挑戰。

乙型肝炎病毒RNA(HBV RNA)由感染肝細胞核內的的共價閉合環狀DNA(covalently closed circular DNA，cccDNA)轉錄產生，所以理論上血液HBV RNA病毒顆粒的存在以及其病毒顆粒的水平可以反映cccDNA的狀態，包括cccDNA的水平及其轉錄活性。這使得HBV RNA檢測有可能代替cccDNA檢測作為抗病毒治療的關鍵點。經實驗證明，cccDNA轉錄為RNA經核衣殼包裹后以病毒樣顆粒形式釋放，這個過程不被核苷酸/核苷類藥物(NAs)治療所阻斷，故在慢性乙肝患者血液中檢測不到HBV RNA時，說明患者肝細胞內的cccDNA消失或者轉錄靜默停止，意味著此時可以停止用藥。

目前熒光PCR法檢測有兩類靶標，一個是檢測HBV DNA，另一個是檢測HBV RNA。HBVDNA主要用于評估HBV感染者病毒復制水平，是抗病毒治療適應證選擇及療效判斷的重要指標，應用廣泛。但目前應用于治療HBV的口服藥物如恩替卡韋、拉米夫定以及核苷類、核苷酸類藥物雖然可有效降低外周HBV DNA載量，但對肝細胞內的cccDNA無明確作用。

HBV RNA可以反映cccDNA的水平及其轉錄活性，由于核苷(酸)類藥物的影響，即使血液中檢測不到HBV DNA，由于cccDNA的持續存在，血液中仍存在HBV RNA，故血液中的HBVRNA在監測抗病毒療效方面具有臨床意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種高準確性和靈敏度的HBV RNA檢測測試劑盒及檢測方法。

本發明的第一方面，提供了一種用于檢測乙型肝炎病毒RNA(HBV RNA)的PCR引物對組，所述引物對組包括第一引物對，所述第一引物對包括如SEQ ID NO.:1所示的正向引物，如SEQ ID NO.:2所示的反向引物，和如SEQ ID NO.:3所示的逆轉錄引物。

在另一優選例中，所述引物對組還包括第二引物對，所述第二引物對包括如SEQID NO.:5所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:6所示的反向引物。

本發明的第二方面，提供了一種用于檢測乙型肝炎病毒RNA(HBV RNA)的探針組，所述探針組包括：如SEQ ID NO.:4所示的針對乙型肝炎病毒的特異性的探針。

在另一優選例中，所述探針組還包括：如SEQ ID NO.:7所示的內標探針。

本發明的第三方面，提供了一種用于檢測乙型肝炎病毒RNA的試劑盒，所述試劑盒包括本發明第一方面所述的PCR引物對組。

在另一優選例中，所述試劑盒還包括本發明第二方面所述的探針組。

在另一優選例中，所述試劑盒還包括HBV RNA應液A，所述HBV RNA反應液A包括本發明第一方面所述的PCR引物對組和本發明第二方面所述的探針組。