[發明專利]一種殺蟲蛋白突變體GNIP1Aa-D420L及其編碼基因和應用

在審

• 申請號: 202210758669.1
• 申請日: 2022-06-30
• 公開（公告）號: CN115109129A
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 宋佳;趙晨;孫博
• 申請（專利權）人: 國家糧食和物資儲備局科學研究院
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C12N15/31;C12N15/70;C12N1/21;A01N47/44;A01P7/04;C12R1/19
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

1.一種殺蟲蛋白突變體GNIP1Aa-D420L，其特征在于，所述殺蟲蛋白突變體GNIP1Aa-D420L是將SEQ ID No.1所示的野生型殺蟲蛋白GNIP1Aa第420位的Asp突變為Leu。

2.根據權利要求1所述的殺蟲蛋白突變體GNIP1Aa-D420L，其特征在于，所述殺蟲蛋白突變體GNIP1Aa-D420L為A1)或A2)所示：

A1)氨基酸序列為SEQ ID No.2所示的蛋白質；

A2)在SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的N端或C端連接蛋白標簽得到的融合蛋白。

3.如權利要求1或2所述的殺蟲蛋白突變體GNIP1Aa-D420L的編碼基因。

4.根據權利要求3所述的編碼基因，其特征在于，所述編碼基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。

5.包含權利要求3或4所述的編碼基因的重組載體。

6.根據權利要求5所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體為將權利要求3或4所述的編碼基因連接到pET-24a(+)的NotⅠ和NdeⅠ酶切位點之間，且保持pET-24a(+)的其他序列不變得到的重組載體pET-24a(+)-GNIP1Aa-D420L。

7.包含利要求5或6所述的重組載體的重組菌。

8.權利要求1或2所述的殺蟲蛋白突變體GNIP1Aa-D420L的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)針對權利要求1或2所述的殺蟲蛋白突變體GNIP1Aa-D420L的突變位點設計攜帶突變位點的引物，以含有野生型殺蟲蛋白GNIP1Aa的編碼基因的質粒為模板，進行定點突變PCR，獲得含有殺蟲蛋白突變體GNIP1Aa-D420L的編碼基因的重組載體；

(2)重組載體轉化宿主細胞，得到重組菌；

(3)培養重組菌，誘導表達蛋白；

(4)回收并純化，即得殺蟲蛋白突變體GNIP1Aa-D420L。

9.權利要求1或2所述的殺蟲蛋白突變體GNIP1Aa-D420L在殺蟲上的應用或在制備殺蟲的產品上的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述蟲為儲糧害蟲；優選的，為殺煙草甲和赤擬谷盜。