[發明專利]用于檢測病原微生物的多核酸適體及其組合

有效

• 申請號: 202210754831.2
• 申請日: 2022-06-30
• 公開（公告）號: CN114807151B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 譚蔚泓;楊秋霞;付曉藝;彭瑞資;李恒軒;宋明慧;羅昭峰;符婷
• 申請（專利權）人: 中國科學院基礎醫學與腫瘤研究所（籌）
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/569
• 代理公司: 北京國翰知識產權代理事務所(普通合伙) 11696
• 代理人: 張天辰

本發明公開了用于檢測病原微生物的多核酸適體及其組合，屬于生物檢測技術領域。本發明公開的核酸適體及其組合，能夠特異性結合病原微生物，因此可用于病原微生物的識別和鑒定。本發明核酸適體使用指數富集配體系統進化技術篩選，本發明篩選的核酸適體用于檢測病原微生物時，特異性強，靈敏度高。此外，核酸適體具有分子量小，穩定性更好，易改造修飾，無免疫原性，制作周期短等特點，相比于抗體，更加適用于病原微生物的檢測。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，具體涉及一種用于檢測病原微生物的多核酸適體及其組合。

背景技術

新冠病毒抗原檢測跟病毒核酸檢測一樣，都是通過檢測病毒的組分來判定是否存在新冠病毒。新冠病毒顆粒中，特異性結構蛋白含量是病毒核酸分子的數千倍。新冠抗原檢測法直接檢測新冠病毒的結構蛋白，不存在擴增放大過程，省去了核酸檢測過程中占據時間較長的擴增步驟，所以具有快速、簡單、便捷、經濟、早期診斷、可信度高等特點。目前，新冠病毒抗原檢測主要使用可以特異性結合新冠結構蛋白的抗體來制備抗體夾心法試劑盒。但是由于新冠病毒變異迅速，而新冠結構蛋白的特異性抗體的篩選過程較為繁雜漫長，新冠病毒抗原檢測試劑盒還存在極大的提升空間。

核酸適體（aptamer）是指通過指數富集的配基系統進化技術（SELEX）篩選分離得到的DNA或者RNA分子，它可以與其它靶標如蛋白質、金屬離子、小分子、多肽甚至整個細胞進行高親和力和特異性的結合，因此在生化分析、環境監測、基礎學、新藥合成等方面展示廣闊的前景。相比于抗體，核酸適體具有分子量小，穩定性更好，易改造修飾，無免疫原性，制作周期短等特點，核酸適體可以通過人工合成等優勢，免去了動物免疫、飼養、蛋白提取和純化等一系列流程。基于核酸適體的性質，新型冠狀病毒核衣殼蛋白的核酸適體具有結構相對穩定，簡單，易于修飾以及短期內可以人工合成的優勢。目前，已有報道核酸適體與抗體的混合夾心法檢測新型冠狀病毒核衣殼蛋白，但是，實現高靈敏度、高特異性仍存在市場需求。

中國專利CN112941078A公開了一種檢測新冠病毒SARS-CoV-2 S1蛋白的核酸適體、篩選方法及其用途。該發明通過體外篩選技術篩選出能和SARS-CoV-2 S1蛋白特異性結合的核酸適體，該核酸適體具有高度的結合性和特異性，能夠與SARS-CoV-2 S1蛋白結合，跟其它病毒無交叉反應；具有高度的結合性和特異性，結合SARS-CoV-2 S1蛋白的下限達到1 ng/ml以下。但該專利未對核酸適體與其他蛋白結合的能力做出評價。因此，能夠結合多個蛋白位點的核酸適體或核酸適體組合仍需進一步研究。

發明內容

本發明的發明目的在于提供一種用于檢測病原微生物的多核酸適體與抗體。

一種核酸適體：所述核酸適體如SEQ ID NO.1-4所示：

如SEQ ID NO.1所示序列N35：

CACGTCGGGGGGGTCACACATGAACCGTGCGGATACGGAGACGAG；

如SEQ ID NO.2所示序列N10：

CGCCTCCTTCCTCTCGGGGTGTGTAGGGTCAGGGAGTGTGAGAGGAGGAGACGAGATCGGCG；

如SEQ ID NO.3所示序列N2-62：

CGCCTCCTTCCACGGGATCGGATTCCCCACTCGGCTCTATCGGATTGGAGACGAGATCGGCG；

如SEQ ID NO.4所示序列N2：

CACGCATAGCCGTGCGGATACGGAACCGTACCATGGGCGGTGGGTGGCCTATGCGTG。

優選地，核酸適體還包括對上述的核酸適體進行修飾得到的序列：

修飾包括以下修飾方法的至少一種：