[發明專利]基于核酸適體乳膠顆粒的病原微生物檢測試紙條

有效

• 申請號: 202210754829.5
• 申請日: 2022-06-30
• 公開（公告）號: CN114814215B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 譚蔚泓;付曉藝;彭瑞資;楊秋霞;李恒軒;宋明慧
• 申請（專利權）人: 中國科學院基礎醫學與腫瘤研究所（籌）
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/548;G01N33/58
• 代理公司: 北京國翰知識產權代理事務所(普通合伙) 11696
• 代理人: 張天辰

本發明公開了基于核酸適體乳膠顆粒的病原微生物檢測試紙條，屬于生物檢測技術領域。本發明使用的試紙條含有基于SARS?CoV?2?核衣殼蛋白的指數富集的核酸適體系統進化技術所獲得多條序列不同的核酸適體，能夠高效、準確地檢測樣品中是否含有SARS?CoV?2。本發明試紙條包括硝酸纖維素膜、結合墊、樣品墊和吸水紙，生產和組裝簡單，并且檢測速度快，檢測準確度高，適合大范圍檢測使用。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及基于核酸適體乳膠顆粒的病原微生物檢測試紙條。

背景技術

新冠病毒抗原檢測跟病毒核酸檢測一樣，都是通過檢測病毒的組分來判定是否存在新冠病毒。新冠病毒顆粒中，特異性結構蛋白含量是病毒核酸分子的數千倍。新冠抗原檢測法直接檢測新冠病毒的結構蛋白，不存在擴增放大過程，省去了核酸檢測過程中占據時間較長的擴增步驟，所以具有快速、簡單、便捷、經濟、早期診斷、可信度高等特點。目前，新冠病毒抗原檢測主要使用可以特異性結合新冠結構蛋白的抗體來制備抗體夾心法試劑盒。但是由于新冠病毒變異迅速，而新冠結構蛋白的特異性抗體的篩選過程較為繁雜漫長，新冠病毒抗原檢測試劑盒還存在極大的提升空間。

核酸適體（aptamer）是指通過指數富集的配基系統進化技術（SELEX）篩選分離得到的DNA或者RNA分子，它可以與其它靶標如蛋白質、金屬離子、小分子、多肽甚至整個細胞進行高親和力和特異性的結合，因此在生化分析、環境監測、基礎學、新藥合成等方面展示廣闊的前景。相比于抗體，核酸適體具有分子量小，穩定性更好，易改造修飾，無免疫原性，制作周期短等特點，核酸適體可以通過人工合成等優勢，免去了動物免疫、飼養、蛋白提取和純化等一系列流程。

新型冠狀病毒核衣殼蛋白的核酸適體具有結構相對穩定，簡單，易于修飾以及短期內可以人工合成的優勢。目前，已有報道核酸適體與抗體的混合夾心法檢測新型冠狀病毒核衣殼蛋白，但是，實現高靈敏度、高特異性仍存在市場需求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于核酸適體乳膠顆粒的病原微生物檢測試紙條，該試紙條能夠迅速。準確地檢測與識別SARS-CoV-2。

為達到上述發明目的，采用如下技術方案。

一種基于核酸適體乳膠顆粒的病原微生物檢測試紙條，包括：硝酸纖維素膜、結合墊、樣品墊和吸水紙；其中，硝酸纖維素膜上含有檢測線和質控線，檢測線所使用的抗體包括SARS-CoV-2-核衣殼蛋白抗體，質控線所使用的抗體包括抗鏈霉親和素抗體；結合墊上含有核酸適體-乳膠顆粒偶聯物。本發明試紙條是制備和組裝均易操作，有利于大規模生產。

優選地，核酸適體包括如下序列：

如SEQIDNO.1所示序列N35：

CACGTCGGGGGGGTCACACATGAACCGTGCGGATACGGAGACGAG；

如SEQIDNO.2所示序列N10：

CGCCTCCTTCCTCTCGGGGTGTGTAGGGTCAGGGAGTGTGAGAGGAGGAGACGAGATCGGCG；

如SEQIDNO.3所示序列N2-62：

CGCCTCCTTCCACGGGATCGGATTCCCCACTCGGCTCTATCGGATTGGAGACGAGATCGGCG；

如SEQIDNO.4所示序列N2：

CACGCATAGCCGTGCGGATACGGAACCGTACCATGGGCGGTGGGTGGCCTATGCGTG。

本發明利用基于SARS-CoV-2-核衣殼蛋白的指數富集的核酸適體系統進化技術所獲得多條序列不同的核酸適體，通過對核衣殼蛋白不同位點的特異性識別結合，從而選擇最優的組合，實現對SARS-CoV-2-核衣殼蛋白的檢測。