[發明專利]一種Angptl3敲除的鼠永生化足細胞系及其應用

有效

• 申請號: 202210754520.6
• 申請日: 2022-06-28
• 公開（公告）號: CN114934021B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 徐虹;冀保威;沈茜;劉俊朝
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬兒科醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/071;C12N15/867;C12N15/12;C12Q1/02
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

本發明提供了人Angptl3敲除的鼠永生化足細胞系，其保藏號為CGMCC?NO.45145，本發明從Angptl3敲除的小鼠中提取原代足細胞，慢病毒轉染制備永生化的Angptl3敲除的鼠足細胞系，使用Nephrin和WT?1抗體進行了足細胞的驗證，永生化的足細胞可以穩定傳30代以上，為研究在腎病綜合征中Angptl3基因表達缺失對足細胞保護提供了理想和穩定的細胞系。該細胞系以進行永生化處理，能大量培養傳代，培養要求相對較為簡單，能夠短時間內獲得大量的實驗用細胞，總體實驗周期較短，適合推廣。

技術領域

本發明屬于生物和醫療技術領域，具體涉及一種Angptl3敲除的鼠永生化足細胞系及其應用。

背景技術

腎病綜合征(nephrotic?syndrome，NS)是一組具有類似臨床表現，不同病因及病理病變的腎小球疾病構成的臨床綜合征。可由多種病因引起，分為原發性、繼發性和遺傳性三大類。許多疾病可引起腎小球毛細血管濾過膜的損傷，導致腎病綜合征。腎病綜合征發展到后期往往演變為尿毒癥，使腎病綜合征的危害威脅生命。

Angptl3是一種分泌性糖蛋白，正常情況下主要在肝臟表達，發生腎病綜合征時在足細胞中表達增高。研究表明Angptl3是導致腎病綜合征的一個很重要的靶點，敲除Angptl3或降低Angptl3的表達可以在很大程度上保護足細胞，減少蛋白尿。

既往對Angptl3的體外研究需要向足細胞中轉染質粒來降低其表達，或者從Angptl3敲除的小鼠中直接提取原代足細胞進行培養。但是上述兩種方法均有弊端，質粒轉染率低，降低Angptl3的表達程度有限；從Angptl3基因敲除的小鼠中直接提取原代足細胞培養周期長，失敗率高，并且原代足細胞生長周期有限，需要反復提取。

以上缺點嚴重影響了對Angptl3的體外研究，需要一種新的Angptl3的體外研究的細胞。

發明內容

為了克服現有技術的缺陷，本發明的目的在于提供一種Angptl3敲除的鼠永生化足細胞系及其應用。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面，提供了一種Angptl3敲除的鼠永生化足細胞系，其保藏號為：CGMCC?NO.45145。

本發明的第二方面，提供前述Angptl3敲除的鼠永生化足細胞系的子代細胞系。

前述的Angptl3敲除的鼠永生化足細胞系或子代細胞系，能夠表達Nephrin蛋白和WT-1蛋白。能夠穩定增殖和傳代。

本發明第三方面，提供前述的Angptl3敲除的鼠永生化足細胞系或子代細胞系的用途，為制備腎病綜合征細胞模型或制備腎病綜合征動物模型。

本發明第四方面，提供前述的Angptl3敲除的鼠永生化足細胞系或子代細胞系的用途，為制備腎病綜合征診斷產品。

本發明第五方面，提供前述的Angptl3敲除的鼠永生化足細胞系或子代細胞系的用途，為開發腎病綜合征相關的生物工程產品。

本發明第六方面，提供前述的Angptl3敲除的鼠永生化足細胞系或子代細胞系的用途，為開發Angptl3缺失相關疾病的生物工程產品。

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：

本發明從Angptl3敲除的小鼠中提取原代足細胞，慢病毒轉染制備永生化的Angptl3敲除的鼠足細胞系，使用Nephrin和WT-1抗體進行了足細胞的驗證，永生化的足細胞可以穩定傳30代以上，為研究在腎病綜合征中Angptl3基因表達缺失對足細胞保護提供了理想和穩定的細胞系。該細胞系以進行永生化處理，能大量培養傳代，培養要求相對較為簡單，能夠短時間內獲得大量的實驗用細胞，總體實驗周期較短，適合推廣。

本發明細胞株保藏信息如下：