[發明專利]與α-芋螺毒素MI特異性結合的適配體及其應用

在審

• 申請號: 202210750630.5
• 申請日: 2022-06-29
• 公開（公告）號: CN115109781A
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 王梁華;郭晗;趙魯明;張小娟;楊成芳;焦炳華;高云;孫銘娟;鄒彬
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍海軍軍醫大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C07K14/435;A61K31/7088;A61P39/02;G01N33/68;C02F1/28
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 趙建敏

本發明涉及生物醫藥工程技術領域，提供了與α?芋螺毒素MI(CTX?MI)特異性結合的適配體及其應用。適配體的序列通式為：5’?ATTGGCACTCCACGCATAGG?N₄₀?CCTATGCGTGCTACCGTGAA?3’；其中，N為A、T、G、C四種脫氧核糖核苷酸中的任意一個，40代表隨機核苷酸的數量，優選為如SEQIDNO.1～SEQIDNO.6中任一條所示的序列，最優選為如SEQIDNO.7～SEQIDNO.9中任一條所示的序列，可以制備成CTX?MI分離富集試劑、純化試劑、拮抗劑或中和劑，還可以制備CTX?MI檢測試劑、檢測試劑盒或檢測傳感器，并將其應用于水體樣品中CTX?MI的檢測，還可以為預防或治療CTX?MI中毒藥物的制備以及水體或水產品中CTX?MI的去除奠定基礎。

技術領域

本發明涉及生物醫藥工程技術領域，具體涉及一種與α-芋螺毒素MI(CTX-MI)特異性結合的適配體及其應用。

背景技術

芋螺毒素(Conotoxins,CTXs)是由腹足綱軟體動物芋螺分泌的多肽類毒素的總稱。其由芋螺的毒液管和毒囊內壁的毒腺分泌，以多種毒肽組成的雞尾酒樣混合形式儲存在毒液囊中，在捕食或防御時可被迅速注入對方體內，造成瞬間的麻痹、抽搐、驚厥甚至死亡。另外CTXs還具有鎮痛、抗腫瘤、抗病毒、抗菌、殺蟲等多種活性，是海洋藥物研發的主要來源之一。CTXs種類繁多，是目前發現的最小的核酸編碼的動物神經毒素肽，可作用于多種電壓門控離子通道和配體門控離子通道。

α-芋螺毒素MI(CTX-MI)是芋螺毒素中分布最廣，毒性最強的種類，可專一性作用于肌肉型煙堿乙酰膽堿受體(AChR)，阻斷神經信號傳遞，其小鼠LD₅₀可達15-20μg/kg，一只芋螺體內含有的CTX-MI就足以造成一個成年人的死亡。由于其作用機制尚不完全明晰，且臨床上也缺少相應的治療藥物及抗毒血清，這給水下作業的工作人員的安全防護和中毒后的治療工作帶來巨大的困難。另外，CTX-MI毒性強、分子量小且易于合成，具有造成生物恐怖的風險，因此需要對其進行快速甄別和靈敏檢測。

然而，目前其檢測方法較為匱乏，主要依賴于高效液相色譜(HPLC)、銅螯合納米磁珠結合生物質譜法(MALDI-TOF-MS)等色譜及質譜技術。這類方法的靈敏度高，可精確分析目標化合物的成份、結構及含量；但檢測儀器昂貴，樣品處理過程繁瑣耗時，對樣品純度要求較高，需要專業人士操作等弊端使其無法被廣泛普及。免疫檢測法如酶聯免疫吸附法(ELISA)是目前公認的靈敏、準確、快捷的檢測手段，但由于CTX-MI屬于小分子多肽，具有抗原性但不具有免疫原性，無法直接從免疫動物體內獲得相應的抗體，因此目前缺乏基于單克隆抗體的CTX-MI免疫分析方法。另一方面，因為尚未發現特異性識別并與CTX-MI結合的化合物，因此缺乏治療或預防其中毒的靶向藥物或先導物。由此可見，特異性分子識別元件的缺乏是實現CTX-MI快速檢測和解毒治療的巨大阻礙之一。

核酸適配體是單鏈DNA或RNA自身經過卷曲折疊形成的三級結構，其經典的篩選方法是指數富集的配基系統進化(systematic evolution of ligands by exponentialenrichment,SELEX)技術。核酸適配體可通過分子間相互作用力，如氫鍵、范德華力等與細胞、蛋白、核酸、脂質、生物小分子等多種靶標物質發生高親和力、強特異性的結合。因其具備抗體的優良特性，且具有穩定性高、易于合成和修飾、方便儲存及運輸、免疫原性低、制備過程不需要使用免疫動物等優點，因此被稱為“化學抗體”，作為新型的分子識別元件，在診斷、檢測、治療、科學研究等領域備受關注。

然而，關于與CTX-MI特異性結合的分子識別探針，與CTX-MI特異性結合的高親和力適配體以及相關的性能評定及應用目前尚無報道。

發明內容

本發明是為解決上述技術問題進行的，目的在于提供一種與CTX-MI特異性結合的適配體及其應用。