[發明專利]一種諾如病毒P顆粒嵌合棘球蚴EG95蛋白的重組蛋白及其應用

在審

• 申請號: 202210750588.7
• 申請日: 2022-06-28
• 公開（公告）號: CN115010814A
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發明（設計）人: 譚志堅;尚志祥;周德榮;林瑞慶;王新秋;劉麗丹;鄺春曼;朱葉;于高博;翁亞彪
• 申請（專利權）人: 佛山市正典生物技術有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/00;A61K39/39;A61K47/42;A61P33/10;C12R1/19
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 潘登

本發明提供了一種諾如病毒P顆粒嵌合棘球蚴EG95蛋白的重組蛋白及其應用，所述重組蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。所述諾如病毒P顆粒嵌合棘球蚴EG95蛋白的重組蛋白可作為棘球蚴疫苗用于防治棘球蚴病，所述棘球蚴疫苗結合諾如病毒P顆粒和棘球蚴EG95抗原兩者的優勢，P顆粒具有高度免疫原性和穩定性，諾如病毒P顆粒作為抗原遞呈載體平臺，EG95蛋白能夠被充分呈遞，具有廣闊的前景。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種諾如病毒P顆粒嵌合棘球蚴EG95 蛋白的重組蛋白及其應用。

背景技術

棘球蚴病(Echinococcosis)又稱包蟲病(Hydatid disease)，是由棘球屬(Echinococcus)絳蟲的中絳期幼蟲寄生于人體及某些動物體內引起的一種嚴重的人畜共患寄生蟲病。我國流行的以細粒棘球絳蟲引起的囊型包蟲病(cystic echinococcosis，CE)為主，細粒棘球蚴病對人畜危害極其嚴重，人畜感染后可在肝臟、肺臟等器官發現占位性病灶(囊泡)，各種動物都可因囊泡破裂產生嚴重過敏反應而死亡。

CN112250748A公開了一種細粒棘球蚴免疫原性蛋白EG95基因組成型表達載體，且提供含有該表達載體的畢赤酵母基因工程菌。表達的重組蛋白與現有羊棘球蚴病EG95亞單位疫苗免疫陽性血清具有良好的反應原性和特異性，與其他重組蛋白抗體無反應。

CN110016457A公開了一株重組細粒棘球蚴Eg95基因的粗糙型布魯氏菌的構建及其疫苗。以粗糙型牛種布魯氏菌弱毒株RA343株為親本株，以蔗糖自殺質粒為載體，將含有特定啟動子序列的細粒棘球蚴Eg95基因經密碼子優化后無痕插入到了布魯氏菌基因組中，成功構建了能夠高效表達型重組細粒棘球蚴 Eg95基因的重組布魯氏菌RA343-Eg95株。該重組菌株不僅保留了原始親本株 RA343的粗糙型特性，對布魯氏菌病良好的免疫保護性，而且該重組菌免疫動物后，能產生針對細粒棘球蚴Eg95抗體，從而實現對細粒棘球蚴病的免疫保護。

目前包蟲病疫苗研究火熱，國內外學者們針對包蟲眾多候選疫苗位點展開了大量研究，EG95是提取細粒棘球蚴六鉤蚴RNA后擴增出相應的cDNA，在細粒棘球蚴原頭節、六鉤蚴和成蟲的生長周期中，EG95基因均有不同程度的表達。目前中國國內僅有一款商品化基因工程疫苗用于棘球蚴病的控制。但在西藏等地區的牛羊免疫EG95基因工程亞單位疫苗實驗中發現，免疫組動物剖檢時仍有部分動物肺臟和肝臟存在包囊，無法完全抵抗包蟲的侵害，并且此疫苗組分僅為EG95蛋白混合Quil A，組分較為簡陋，無法充分呈現EG95蛋白的免疫原性。

因此，提供已一種能夠充分呈現EG95蛋白的重組疫苗，對棘球蚴病的防治具有重要應用價值。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明的目的在于提供一種諾如病毒P顆粒嵌合棘球蚴蛋白的EG95重組蛋白及其應用。所述諾如病毒P顆粒嵌合棘球蚴EG95 蛋白的重組蛋白可作為棘球蚴疫苗用于防治棘球蚴病，所述棘球蚴疫苗結合諾如病毒P顆粒和棘球蚴EG95抗原兩者的優勢，P顆粒具有高度免疫原性和穩定性，P顆粒在處于低溫、冷凍、凍干和環境溫度狀態下都很穩定，并且由于每個 P單體具有三個表面環，將外源抗原插入這些環中會使P顆粒表面有24至72 個抗原拷貝，這可以大大增強抗原的抗原性和免疫原性。本發明所述諾如病毒P 顆粒嵌合棘球蚴EG95蛋白的重組蛋白免疫原性好，EG95蛋白能夠被充分呈現，所述諾如病毒P顆粒嵌合棘球蚴EG95蛋白的重組蛋白具有廣闊的前景。

為達到此發明目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供一種諾如病毒P顆粒嵌合棘球蚴EG95蛋白的重組蛋白，所述重組蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

諾如病毒P顆粒蛋白就是一個良好的免疫載體，諾如病毒最早是在1929年的俄州諾沃克發生胃腸炎暴發期間從糞便樣本中采集到的，整個病毒由具明顯杯狀凹陷的無包膜蛋白外殼組成，故將其命名為杯狀病毒科中的一個新屬-諾如病毒(Norwalk Viruses，NoV)。