[發明專利]一種血漿lncRNA檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202210743696.1
• 申請日: 2022-06-27
• 公開（公告）號: CN115044669B
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發明（設計）人: 呂智美;王榮;胡錦繡;劉冰
• 申請（專利權）人: 山東第一醫科大學附屬省立醫院（山東省立醫院）
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113;C12N15/11;C12Q1/6851;A61K45/00;A61P3/10;A61P13/12
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 孫光遠

本發明公開了一種血漿lncRNA檢測試劑盒及其應用。lncRNA的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。通過RNA?seq篩選獲得糖尿病腎病腎組織中差異表達的lncRNA(ENST00000436340.2)標記物，通過功能實驗證實lncRNA調控腎臟固有細胞足細胞損傷。用于檢測臨床血漿樣本，結果顯示糖尿病腎病患者血漿中lncRNA相對表達量顯著高于健康對照組人群。

技術領域

本發明涉及生物醫學技術技術領域，更具體的說是涉及一種血漿lncRNA?檢測試劑盒及其應用。

背景技術

近年來，全球糖尿病患病率急劇上升，成為危害人類健康的一個公共衛生問題，糖尿病腎病(diabetic?kidney?disease,DKD)是糖尿病最常見的并發癥之一，是導致終末期腎臟病(end?stage?renal?disease,ESRD)的主要原因，約占終末期腎衰竭的40％。糖尿病所導致的腎臟損害幾乎可累及包括腎小球、腎小管和腎間質在內的所有的腎臟結構，并且其進展速度之快遠遠高于非糖尿病腎病患者。足細胞是位于腎小球基底膜外側的終末分化的上皮細胞，是構成腎小球濾過屏障的關鍵部分，足細胞損傷是DKD發生發展的關鍵起始事件，在DKD早期即可觀測到足細胞結構和功能的改變。早期準確診斷是DKD?治療及延緩腎臟病變進程的重中之重。DKD診斷以及腎臟病變評估的金標準是腎活檢穿刺，存在有創、費用高、技術要求高等局限性，臨床工作中亟需一個簡單易行、穩定可靠的鑒別方法。

長鏈非編碼RNA(long?non-coding?RNA,lncRNA)是一類轉錄本長度超過?200個核苷酸的RNA分子的總稱，其缺乏編碼蛋白的能力，在基因表達、細胞功能、疾病的發生發展等方面發揮重要作用。近年來，隨著微陣列芯片及高通量測序等技術的快速發展，lncRNA的生物學特點及功能逐漸被認識，越來越多的證據表明lncRNA的異常表達與腎臟疾病，尤其是糖尿病腎病的發生與發展密切相關。血清血漿中的LncRNAs性質穩定、含量豐富、易于定量檢測，且存在顯著的疾病特異性，可以作為疾病的生物標志物。臨床上尚缺乏用于?DKD輔助診斷的較為穩定的生物標志物的報道。

因此，拓寬該領域研究，篩選DKD特異或異常表達的血清血漿LncRNAs?作為生物標志物，以提高DKD診斷的靈敏性和預后判斷的準確性，明確其在DKD患者中的臨床價值，為糖尿病腎病的臨床治療提供新的策略是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種血漿lncRNA檢測試劑盒及其應用。篩選獲得糖尿病腎病腎組織中差異表達的lncRNA，發現ENST00000436340.2在糖尿病腎病腎組織中表達明顯增高，主要分布于腎小球足細胞，功能實驗顯示?ENST00000436340.2調控足細胞損傷及骨架重排。同時ENST00000436340.2?在糖尿病腎病患者的血漿中表達明顯上調，且其表達水平與蛋白尿水平相關。本發明發現的ENST00000436340.2作為全新的lncRNA分子標記物在糖尿病腎病患者疾病進展的預測、評估方面具有一定的應用前景。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種檢測lncRNA表達量的試劑在制備用于診斷和/或評估糖尿病腎病的試劑盒中的應用；lncRNA的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。

優選的：檢測lncRNA表達量的試劑包括擴增所述lncRNA的核苷酸序列的引物，擴增所述lncRNA的核苷酸序列的引物：ENST00000436340.2F核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示和ENST00000436340.2?R如SEQ?ID?No.3所示。

優選的：表達量為基于lncRNA參比內參基因的相對表達量。

優選的：內參基因為β-actin基因。