[發(fā)明專利]miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體及其制備方法和應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202210742968.6 | 申請(qǐng)日： | 2022-06-27 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN115093484A | 公開（公告）日： | 2022-09-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 孫愛友;王眾;孫冰;喬長(zhǎng)晟 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 蘇州乙水茉生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C07K19/00 | 分類號(hào)： | C07K19/00;C07K1/107;C07K1/02;C12N15/70;C07K1/08;C07K1/36;A01N43/80;A01N47/44;A01P3/00;A01P21/00;A01G13/00 |
| 代理公司： | 上海大視知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 31314 | 代理人： | 顧小偉 |
| 地址： | 215211 江蘇省蘇*** | 國(guó)省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | mipep156a 噁霉靈偶 聯(lián)體 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體，其特征在于，包括miPEP156a單體或miPEP156a多重復(fù)單元融合蛋白、以及琥珀酰噁霉靈，所述miPEP156a單體或所述miPEP156a多重復(fù)單元融合蛋白偶聯(lián)至所述琥珀酰噁霉靈，所述琥珀酰噁霉靈通過噁霉靈和琥珀酸酐反應(yīng)制備而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體，其特征在于，所述miPEP156a多重復(fù)單元融合蛋白為miPEP156a二重復(fù)單元融合蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體，其特征在于，所述miPEP156a二重復(fù)單元的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將所述噁霉靈和所述琥珀酸酐反應(yīng)制備成所述琥珀酰噁霉靈；
(2)將所述miPEP156a單體或所述miPEP156a多重復(fù)單元融合蛋白偶聯(lián)至所述琥珀酰噁霉靈，獲得所述miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)具體為：將所述噁霉靈和所述琥珀酸酐溶于第一溶劑中，然后加入催化劑，避光攪拌反應(yīng)，獲得所述琥珀酰噁霉靈。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體的制備方法，其特征在于，在所述步驟(1)中，所述第一溶劑為無(wú)水吡啶，所述琥珀酸酐的摩爾量為所述噁霉靈的摩爾量的1.5倍～4倍，所述催化劑為4-二甲氨基吡啶，所述避光攪拌反應(yīng)的溫度為40℃～60℃，所述避光攪拌反應(yīng)的時(shí)間為4h～9h。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體的制備方法，其特征在于，在所述步驟(2)中，所述miPEP156a多重復(fù)單元融合蛋白通過將所述miPEP156a多重復(fù)單元融合蛋白的核苷酸序列重組于表達(dá)載體中獲得重組表達(dá)載體，然后將所述重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，篩選陽(yáng)性克隆菌發(fā)酵純化制備而成。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)具體為：
(21)將所述琥珀酰噁霉靈溶于第二溶劑中，然后加入碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺進(jìn)行活化，獲得活化溶液；
(22)將所述miPEP156a單體或所述miPEP156a多重復(fù)單元融合蛋白溶于第三溶劑中，獲得含肽溶液；
(23)將所述活化溶液加入到所述含肽溶液中進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，獲得所述miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體的制備方法，其特征在于，在所述步驟(2)中，所述第二溶劑為二甲基甲酰胺，所述碳二亞胺的摩爾量和所述N-羥基琥珀酰亞胺的摩爾量分別為所述琥珀酰噁霉靈的摩爾量的1.5倍～4倍，所述活化的溫度為室溫，所述活化的時(shí)間為4h-6h，所述第三溶劑為碳酸鹽緩沖液，所述miPEP156a單體的摩爾量或所述miPEP156a多重復(fù)單元融合蛋白的摩爾量為所述的琥珀酰噁霉靈的摩爾量的0.1倍～0.3倍，所述偶聯(lián)反應(yīng)采用室溫反應(yīng)過夜。
10.根據(jù)權(quán)利要求1～權(quán)利要求3中任一項(xiàng)所述的miPEP156a與噁霉靈偶聯(lián)體在促進(jìn)植物發(fā)芽生長(zhǎng)和增強(qiáng)植物抗病性中的應(yīng)用。
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