[發明專利]一種用于多種類型臨床樣本的病原微生物核酸保存液及其應用

在審

• 申請號: 202210740049.5
• 申請日: 2022-06-28
• 公開（公告）號: CN115141875A
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 雷春燕;尹晗琪;孫詩園
• 申請（專利權）人: 廣州盤古醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12N15/10
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 林德強

本發明屬于生物技術領域，公開了一種用于多種類型臨床樣本的病原微生物核酸保存液及其應用，具體公開了一種樣本保存液，包括以下成分：硫代氰酸鹽、緩沖液、絡合劑、表面活性劑、防腐劑、無機鹽、蛋白物質和DNA穩定劑。本發明通過在保存液中加入硫代氰酸鹽、緩沖液、絡合劑、表面活性劑、防腐劑、無機鹽、蛋白物質和DNA穩定劑，使保存液可以對微生物樣本中的微生物進行常溫保存，確保可以在室溫條件下14天內有效保持微生物群結構及多樣性，降低微生物保存的要求條件及成本，滿足長途運輸的需求，實現在外出采樣、樣品運輸等特殊條件下對微生物樣本中各微生物的有效保存。

技術領域

本發明屬生物技術領域，具體涉及一種用于多種類型臨床樣本的病原微生物核酸保存液及其應用。

背景技術

為了降低生物樣本在保存和運輸過程中的成本，解決核酸分子在常溫下不穩定的問題，很多研究機構都報道了各種類型的樣本保存液。主要集中在體液、糞便樣本的保存，每種保存液適用的生物樣本十分有限，如有的保存液只適用于腦脊液、血液、肺泡灌洗液、糞便、拭子樣本中的一種或幾種，且不同種保存液要求的采樣量各不相同。面對臨床生物樣本種類的多樣性而言，這無形中增加臨床收樣的復雜程度。另外很大一部分保存液在不破壞細胞/微生物結構的前提下，通過抑制各類核酸酶活性來保護胞內核酸的完整性，對病原微生物的滅活效果不佳。也有保存液通過裂解細胞/微生物結構來達到滅活的目的，但此時核酸暴露，極易降解，樣本保存時間十分有限。在抑制微生物繁殖、避免微生物核酸降解的同時優化樣本采集和預處理方法，從而減少采樣方法、采樣量對檢測結果的影響，進一步提高樣本處理效率，減輕檢驗人員感染風險，為此提供一種可用于臨床多種樣本類型其病原微生物核酸保存的保存液十分必要。

發明內容

本發明第一方面的目的，在于提供一種樣本保存液。

本發明第二方面的目的，在于提供本發明第一方面的樣本保存液的制備方法。

本發明第三方面的目的，在于提供一種核酸提取試劑。

本發明第四方面的目的，在于提供一種試劑盒。

本發明第五方面的目的，在于提供本發明第一方面的樣本保存液、本發明第三方面的核酸提取試劑或本發明第四方面的試劑盒在微生物樣本保存中的應用。

本發明第六方面的目的，在于提供一種微生物樣本保存方法。

為了實現上述目的，本發明所采取的技術方案是：

本發明的第一個方面，提供一種樣本保存液，包括以下成分：硫代氰酸鹽、緩沖液、絡合劑、表面活性劑、防腐劑、無機鹽、蛋白物質和DNA穩定劑。

優選地，所述樣本保存液包括以下成分：硫代氰酸鹽1～10M、緩沖液50～300mM、絡合劑200～400mM、表面活性劑5v/v％～30v/v％、防腐劑0.01v/v％-0.1v/v％、無機鹽50～250mM、蛋白物質0.05v/v％～0.3v/v％、DNA穩定劑1v/v％～10v/v％。

進一步優選地，所述樣本保存液包括以下成分：硫代氰酸鹽2～6M、緩沖液100～200mM、絡合劑200～300mM、表面活性劑5v/v％～20v/v％、防腐劑0.01v/v％-0.05v/v％、無機鹽100～250mM、蛋白物質0.05v/v％～0.2v/v％、DNA穩定劑1v/v％～8v/v％。

更進一步優選地，所述樣本保存液包括以下成分：硫代氰酸鹽2～5M、緩沖液100～200mM、絡合劑200～250mM、表面活性劑5v/v％～15v/v％、防腐劑0.01v/v％-0.05v/v％、無機鹽50～200mM、蛋白物質0.05v/v％～0.1v/v％、DNA穩定劑1v/v％～5v/v％。

優選地，所述硫代氰酸鹽為硫氰酸胍、硫氰酸鈉、硫氰酸鉀中的一種或多種；進一步為硫氰酸胍。