[發(fā)明專利]一種羅漢果中活性物質(zhì)篩選方法及應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202210738374.8 | 申請(qǐng)日： | 2022-06-28 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN115015534A | 公開（公告）日： | 2022-09-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳旭;王娟;劉以撒;周璐煒;竇童;劉國(guó)翔;李肖娟;韓夢(mèng)潔 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 桂林醫(yī)學(xué)院 |
| 主分類號(hào)： | G01N33/53 | 分類號(hào)： | G01N33/53;G01N30/02;G01N30/72;G01N30/86 |
| 代理公司： | 桂林市華杰專利商標(biāo)事務(wù)所有限責(zé)任公司 45112 | 代理人： | 楊雪梅 |
| 地址： | 541004 廣西*** | 國(guó)省代碼： | 廣西;45 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 羅漢果 活性 物質(zhì) 篩選 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種羅漢果中活性物質(zhì)篩選方法，其特征在于：包括如下步驟：
S1、采購藥物制劑：
采購羅漢果皂苷V、羅漢果皂苷粗提取物、蘇黃止咳膠囊、卵清蛋白和Al(OH)3；
S2、動(dòng)物模型構(gòu)建：
45只雌性BALB/c小鼠購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司；
C組：動(dòng)物分成空白組，M組：模型組，SGFE組：羅漢果皂苷粗提取物組，V組：羅漢果甜苷V組和P組：陽性藥物組；
在第0、7、14天分別對(duì)M組、V組、SGFE組和P組小鼠給予0.1ml致敏液腹腔注射，C組給予PBS溶液腹腔注射；
在第21-32天每天給予M組、V組、SGFE組和P組小鼠1%OVA溶液噴霧，同時(shí)對(duì)V組和P組小鼠分別給予羅漢果皂苷V 50mg/kg、羅漢果皂苷粗提取物50mg/kg以及蘇黃止咳膠囊50mg/kg；
最后一次噴霧24小時(shí)后處死小鼠，取肺臟、肝臟、肺泡灌洗液和血液；
S3、動(dòng)物模型驗(yàn)證：
S31、HE染色病理檢驗(yàn)；
S32、ELISA檢驗(yàn)：
使用ELISA試劑盒，按照說明書測(cè)定血清中的IgE、IL-5、IL-13以及IL-17A含量變化；
S4、儀器分析測(cè)定：
采用液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)聯(lián)用檢測(cè)之前獲取的C組、M組、V組和SGFE組小鼠肝臟組織；
S5、代謝組學(xué)分析：
將肝臟中的注釋代謝物導(dǎo)入SIMCA-P 14.0進(jìn)行主成分分析，分別對(duì)C組與M組和M組與V組或SGFE組進(jìn)行正交偏最小二乘分析，評(píng)估模型并篩選出關(guān)鍵差異代謝物；對(duì)差異代謝物進(jìn)行富集，導(dǎo)入Metaboanalys 5.0 M組與C組、M組和V組或SGFE組之間的差異變化通路，并對(duì)其進(jìn)行富集。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種羅漢果中活性物質(zhì)篩選方法，其特征在于：所述步驟S1中，羅漢果皂苷V購自普思生物科技有限公司，羅漢果皂苷V的純度≥95%，其CAS號(hào)為88901-364；
羅漢果皂苷粗提取物購自萊茵股份有限公司，其羅漢果皂苷V的純度≥52.26%；
蘇黃止咳膠囊購自揚(yáng)子江藥業(yè)有限公司；
卵清蛋白購自源葉生物科技有限公司，其純度為98%；
Al(OH)3購自西安赫特有限公司。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種羅漢果中活性物質(zhì)篩選方法，其特征在于：所述步驟S4中儀器分析測(cè)定具體包括：
S41、色譜條件質(zhì)譜檢測(cè)：
色譜儀器采用Thermo Ultimate 3000，使用ACQUITY UPLC? HSS T3 1.8 μm，2.1×150mm色譜柱，自動(dòng)進(jìn)樣器溫度設(shè)為8℃，以0.25mL/min的流速，40℃的柱溫，進(jìn)樣2μL進(jìn)行梯度洗脫，流動(dòng)相為正離子0.1%甲酸水（C）-0.1%甲酸乙腈（D）；負(fù)離子5mM甲酸銨水（A）-乙腈（B）；
質(zhì)譜儀器使用Thermo Q Exactive Plus，電噴霧離子源ESI，正負(fù)離子電離模式，正離子噴霧電壓為4.20kV，負(fù)離子噴霧電壓為3.50kV，鞘氣30arb，輔助氣10arb；毛細(xì)管溫度325℃，以分辨率70000進(jìn)行全掃描，掃描范圍81-1000，并采用HCD進(jìn)行二級(jí)裂解，碰撞電壓為30eV，同時(shí)采用動(dòng)態(tài)排除去除無必要的MS/MS信息；
S42、數(shù)據(jù)處理：
代謝物的鑒定首先根據(jù)精確分子量進(jìn)行確認(rèn)，分子量誤差為=30ppm，后續(xù)根據(jù)MS/MS碎片模式對(duì)HMDB，METLIN，Massbank，LipidMaps以及mzClound數(shù)據(jù)庫確認(rèn)注釋獲得代謝物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種羅漢果中活性物質(zhì)篩選方法的應(yīng)用，其特征在于：應(yīng)用于SOVA誘導(dǎo)的肺部炎癥。
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