[發明專利]一種誘導少突膠質前體細胞向少突膠質細胞分化的方法和試劑盒

有效

• 申請號: 202210735781.3
• 申請日: 2022-06-27
• 公開（公告）號: CN115044557B
• 公開（公告）日: 2023-09-01
• 發明（設計）人: 徐運;張智;李成剛;孫亮;徐露珊;舒鑫;趙晨晨
• 申請（專利權）人: 南京鼓樓醫院
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 戴朝榮

本發明提供一種誘導少突膠質前體細胞向少突膠質細胞分化的方法，具體為向少突膠質前體細胞的培養基中加入厚樸酚或和厚樸酚中的至少一種。OPC體外培養的第7天，在含有T3(三碘甲狀腺原氨酸)和CNTF的分化培養基中分別加入5、10μM的和厚樸酚和厚樸酚。結果表明，與對照組相比，和厚樸酚、厚樸酚均能增加成熟OL髓鞘蛋白(如MBP、PLP1、MAG)的表達，同時降低OPC標志物NG2的表達；分別用MBP和NG2免疫熒光染色標記OL和OPC，和厚樸酚與厚樸酚處理可顯著增加OPC分化為OL的比例。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種誘導少突膠質前體細胞向少突膠質細胞分化的方法和試劑盒。

背景技術

腦白質，是大腦內部神經纖維聚集的地方，也是髓鞘聚集的地方。少突膠質細胞(Oligodendrocyte，OL)是脊椎動物中樞神經系統形成髓鞘的唯一細胞，髓鞘包裹神經元的軸突產生電絕緣的區段，為神經元信號傳遞和神經纖維的營養及支持起重要作用。而諸多神經系統疾病會出現明顯的腦白質損傷和破壞，例如多發性硬化(MS)、佩梅病(Pelizaeus-Merzbacher?disease)、常染色體顯性遺傳病合并皮質下梗死和白質腦病(CADASIL)等，而阿爾茨海默病、肌萎縮性側索硬化、腦血管病等神經疾病也會出現一定程度的腦白質損傷。因此研究腦白質損傷的機制、減少腦白質損傷以及促進腦白質的修復等多個環節都是目前的研究重點，急需科研人員展開探索，而其中最重要的實驗技術就是體外培養少突膠質細胞以及相關的細胞技術。

目前體外直接分離培養少突膠質細胞的方法產量低，較為常見的方法是培養少突膠質前體細胞(Oligodendrocyte?progenitor?cell，OPC)再進行誘導分化。一般采用10-30μM?T3(Triiodothyronine)和/或5-10ng/ml的CNTF來誘導原代培養的OPC，經歷較長時間才能部分分化為少突膠質細胞，表現為分化3天后才能檢測到髓鞘相關蛋白MBP、MAG、PLP1等表達，可見目前的方法所需時間長，且效率低下。因此，本發明提供一種誘導少突膠質前體細胞向少突膠質細胞分化的方法和試劑盒以解決上述問題。

發明內容

本發明針對現有技術中的不足，提供一種誘導少突膠質前體細胞向少突膠質細胞分化的方法。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種誘導少突膠質前體細胞向少突膠質細胞分化的方法，具體為向少突膠質前體細胞的培養基中加入厚樸酚或和厚樸酚中的至少一種。OPC體外培養的第7天，在含有T3(三碘甲狀腺原氨酸)和CNTF的分化培養基中分別加入5、10μM的和厚樸酚和厚樸酚。結果表明，與對照組相比，和厚樸酚、厚樸酚均能增加成熟OL髓鞘蛋白(如MBP、PLP1、MAG)的表達，同時降低OPC標志物NG2的表達；分別用MBP和NG2免疫熒光染色標記OL和OPC，和厚樸酚與厚樸酚處理可顯著增加OPC分化為OL的比例。

進一步地，所述厚樸酚或和厚樸酚在少突膠質前體細胞培養基中的濃度不超過100μM；經試驗論證，和厚樸酚、厚樸酚(magnolol)兩種同分異構體對少突細胞系的毒性表現為：濃度在50μM以下時，和厚樸酚、厚樸酚都不會影響OPC的活力；當濃度達到100μM時，OPC的活力明顯下降。

進一步地，所述培養基是包含DMEM/F12、B27、bFGF、PDGF-AA、青霉素/鏈霉素溶液的培養基。

本發明還提供一種誘導少突膠質前體細胞向少突膠質細胞分化的試劑盒，包含厚樸酚或和厚樸酚中的至少一種以及上述的培養基。

本發明的有益效果是：本發明提供了一種誘導少突膠質前體細胞向少突膠質細胞分化的方法，通過向少突膠質前體細胞的培養基中加入濃度不超過100μM的厚樸酚或和厚樸酚中的至少一種，可以快速、大量地誘導OPC分化為OL，誘導時間短，效率高。

附圖說明

圖1為和厚樸酚、厚樸酚的化學結構式；