[發明專利]一種結合QuEChERS和柱前衍生前處理測定煙葉中抗蚜威農藥殘留的方法

在審

• 申請號: 202210732114.X
• 申請日: 2022-06-24
• 公開（公告）號: CN115420813A
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 王煥琦;王正強;楊金川
• 申請（專利權）人: 貴州省產品質量檢驗檢測院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京博海嘉知識產權代理事務所(普通合伙) 16007
• 代理人: 郝彥東

1.一種結合QuEChERS和柱前衍生前處理測定煙葉中抗蚜威農藥殘留的方法，其特征在于：

先將煙葉樣品用1％(v/v)乙酸乙腈溶液震蕩提取后，通過QuEChERS前處理除去雜質，取除雜后的前處理液在高溫強堿(NAOH)條件下水解，樣品水解后與.OPA/2-巰基乙醇溶液發生衍生化反應，生成具有強熒光吸收的異氮(雜)茚基衍生物，使用高效液相色譜儀-熒光檢測器檢測。

具體包括以下步驟：

步驟1：煙葉樣品震蕩提取：稱取10.00g均質完畢樣品(市售煙葉)于50ml離心管中，加入1％(v/v)乙酸乙腈溶液10ml和2-3g NaCl后，振蕩提取10min后，于9500r/min離心5min。

步驟2：QuEChERS凈化：取上層清液5mL于預先加有200mg PSA和900mg無水硫酸鎂(MgSO4)的離心管中，渦旋提取15s，在9500r/min離心5min，取上層提取液2.0ml于試管中，氮氣濃縮至近干。

步驟3：柱前衍生過程：取凈化好的前處理液，分別加入(pH＝3)酸化水溶液500μl、250μlOPA/2-巰基乙醇溶液和250μl0.05 mol/L氫氧化鈉水溶液渦旋1min溶解，經0.2μm微孔膜過濾于進樣小瓶中,用(pH＝3)酸化水溶液定容1ml，80℃避光水浴加熱30min后，衍生完成。

步驟4、高效液相色譜-熒光檢測器(HPLC-FLD)分析檢測。

2.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟1中，所述的震蕩提取方法，包括：

提取液通過以下方法制備得到：取1ml乙酸溶于100ml乙腈中得到1％(v/v)乙酸乙腈溶液，Nacl的添加量為2-3g。

3.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟2中，所述的QuEChERS凈化，包括：QuEChERS凈化包的吸附劑填料種類和比例為：PSA 200mg+MgSO4900 mg作為凈化吸附劑。

4.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟3中，所述的柱前衍生過程包括：(pH＝3)酸化水溶液通過以下方法制備得到：用HCl將500ml凈水酸化到pH＝3，并用已校正的pH計進行測定。

5.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟3中，所述的柱前衍生過程包括：0.05mol/L硼酸鈉水溶液通過以下方法制備得到：稱取19.1g Na₂B₄O₇·10H₂O，完全溶解于1L水中。溶解過程可能會將近1小時。

6.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟3中，所述的柱前衍生過程包括：氫氧化鈉水溶液通過以下方法制備得：稱取片狀NaOH 1g于500mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，混合均勻。用0.45μm的濾膜過濾并脫氣，濾液儲存于棕色瓶中。

7.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟3中，所述的柱前衍生過程包括：OPA/2-巰基乙醇溶液通過以下方法制備得：取50mg OPA試劑于5mL甲醇中，緩慢旋轉使其完全溶解后，轉移至一個500mL的容量瓶中，用硼酸鈉溶液稀釋到刻度并混合均勻，用0.45μm的濾膜過濾并脫氣。然后，加入0.5mL 2－巰基乙醇，緩慢旋轉直至混合均勻。一旦2-巰基乙醇加入后，切勿再將溶液脫氣，將此溶液置于一個密閉的棕色玻璃儲液瓶中，用鋁箔包裹避光保存。

8.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟3中，所述的柱前衍生過程包括：氫氧化鈉水溶液的添加量為250ul,OPA/2-巰基乙醇溶液的添加量為250ul.衍生化溫度和時間為80℃避光水浴加熱30min后。

9.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟4中，HPLC-FLD分析檢測，包括：

(1)色譜條件如下：EXTEND-C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；柱溫：30℃，進樣體積：400μl，流速：1.0ml/min，FLD檢測器：激發波長：339nm；發射波長：445nm；增益：10，流動相：A相為純水，B相為色譜甲醇，C相為色譜乙腈，梯度洗脫程序：0-5.3min,88％A，12％B，5.3-14min,88-68％A，12-16％B，0-16％C，14-18min，68-50％A，16-25％B，16-25％C，20-30min，50-88％A，25-12％B，25-0％C。