[發(fā)明專利]一種誘導(dǎo)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210718913.1
• 申請(qǐng)日: 2022-06-23
• 公開（公告）號(hào): CN114958723A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉建萍;余鵬;郝好杰;張鈺英;劉爽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12N5/0775
• 代理公司: 北京知呱呱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11577
• 代理人: 朱芳

1.一種誘導(dǎo)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞的方法，其特征在于，包括如下步驟：

UC-MSCs以2x10^5/孔的細(xì)胞鋪于六孔板中，待細(xì)胞長滿六孔板70％-80％時(shí)，加入S1階段誘導(dǎo)液進(jìn)行S1階段培養(yǎng)；

第3-5天時(shí)更換為S2階段誘導(dǎo)液進(jìn)行S2階段培養(yǎng)；

第8-10天時(shí)更換為S3階段誘導(dǎo)液進(jìn)行S3階段培養(yǎng)；

第15-17天時(shí)更換為S4階段誘導(dǎo)液進(jìn)行S4階段培養(yǎng)；

第20-24天時(shí)結(jié)束誘導(dǎo)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，50ml所述S1階段誘導(dǎo)液包括：(42.85-43.85)ml DMEM:F12、(4-5)ml 10％FBS、500ul 100x NA、50ul 1000x EGF、50ul 1000xβ-巰基乙醇、500ul 100x青霉素-鏈霉素、50ul 1000x Activin A。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，50ml所述S2階段誘導(dǎo)液包括：(42.95-43.95)ml DMEM:F12、(4-5)ml 10％FBS、500ul 100x NA、50ul 1000x EGF、500ul 100x青霉素-鏈霉素。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，50ml所述S3階段誘導(dǎo)液包括：(46.45-46.95)ml DMEM:F12、(0.5-1ml)2％FBS、50ul 1000x bFGF、500ul 100x ITS、500ul 100xExendin-4、500ul 100x NA、500ul 100x青霉素-鏈霉素。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，50ml所述S4階段誘導(dǎo)液包括：47.95mlDMEM:F12、500ul 100x NA、500ul 100x Exendin-4、500ul 100x ITS、50ul 1000x bFGF、500ul 100x青霉素-鏈霉素。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

UC-MSCs以2x10^5/孔的細(xì)胞鋪于六孔板中，待細(xì)胞長滿六孔板70％-80％時(shí)，加入S1階段誘導(dǎo)液進(jìn)行S1階段培養(yǎng)；

第4天時(shí)更換為S2階段誘導(dǎo)液進(jìn)行S2階段培養(yǎng)；

第9天時(shí)更換為S3階段誘導(dǎo)液進(jìn)行S3階段培養(yǎng)；

第16天時(shí)更換為S4階段誘導(dǎo)液進(jìn)行S4階段培養(yǎng)；

第22天時(shí)結(jié)束誘導(dǎo)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在所述S2階段培養(yǎng)中，每2天更換誘導(dǎo)液一次。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在所述S3階段培養(yǎng)中，每3天更換誘導(dǎo)液一次。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在所述S4階段培養(yǎng)中，每2-3天更換誘導(dǎo)液一次。