[發明專利]一種基于LAMP和Multi-LAMP的快速檢測細胞種屬及交叉污染的試劑組

在審

• 申請號: 202210705223.2
• 申請日: 2022-06-21
• 公開（公告）號: CN114891862A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 沈超;趙慧儀;趙佳曦;皮睿琦;楊媚媚
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 常海濤

本發明公開了一種基于LAMP和Multi?LAMP的快速檢測細胞種屬及交叉污染的試劑組，屬于生命科學及醫學領域。本發明的試劑組包含核苷酸序列SEQ ID NO.1?56所示的用于鑒定14種種屬的引物、14種種屬的DNA、LAMP反應試劑等，14種種屬分別為牛、敘利亞倉鼠、貓、狗、人、小鼠、雞、豬、中國倉鼠、大鼠、兔、豚鼠、綠猴、恒河猴。本發明不需要提取樣品DNA，樣品經過快速裂解后，可以直接在水浴鍋中進行LAMP反應，結果肉眼可讀。本發明可以在一管中同時檢測出13種種屬的細胞。

技術領域

本發明屬于生命科學及醫學領域，主要涉及到一種實驗用細胞種屬，及其他種屬交叉污染的快速檢測試劑組。

背景技術

細胞是生命科學和醫學領域體外研究的重要模型，為了確保相關研究的正確性和可重復性，細胞的種屬必須是正確的，且沒有其他種屬污染。原代細胞在分離的時候，細胞系在建系的時候，取材錯誤，耗材共用會導致交叉污染。永生化的細胞因為具備無限傳代的能力，在傳代的過程中，操作失誤也很容易引入其它細胞，導致污染。在細胞培養相關研究的早期，人們就意識到了細胞種屬來源鑒定和交叉污染檢測的重要性，一旦身份錯誤的細胞被使用，相關研究無效，造成各種資源，時間和金錢的浪費。錯誤的實驗結論如果用于臨床，后果會非常嚴重。

目前關于細胞種屬鑒定及交叉污染檢測的技術主要有同工酶法和PCR法。在過去的五六十年，同工酶檢測一直是種屬鑒定的標準方法，該方法是基于不同種屬間同工酶(葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G6PD，乳酸脫氫酶LD，核苷磷酸化酶NP，蘋果酸脫氫酶MD)電泳條帶數量和大小的差異來鑒定細胞的種屬。同工酶分析需要優化實驗條件，包括電泳、顯色時間來確定合適的條帶遷移距離，以及選擇合適的酶的組合來判斷預期物種。有些物種的條帶相似，很難區分，因此電泳結果的分析需要跟一組已知物種進行比對，才能確定種屬來源。此外，商業化的試劑盒已于2015年停止銷售，用于配制電泳緩沖液的藥品在管控范圍內，很難購買。這些因素限制了同工酶電泳在細胞種屬鑒定中的應用。

細胞種屬鑒定的PCR法是最近20年發展起來的，該方法通過PCR儀擴增種屬特異性基因獲得不同大小的條帶，通過瓊脂糖凝膠電泳來判斷細胞的種屬來源，跟同工酶法相比較，檢測速度較快，相關試劑容易購買，但是需要PCR儀，DNA成像儀。

環介導等溫擴增法LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)是一種新型的核酸擴增技術，針對目的基因設計4條引物，恒溫反應幾十分鐘，就能肉眼判斷實驗結果。該方法比PCR法更簡單，靈敏度更高，不需要價格萬元以上的PCR儀，普通的水浴鍋，就能滿足實驗需求。目前還沒有人將LAMP用于細胞種屬鑒定和交叉污染的檢測中。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于LAMP和Multi-LAMP的快速檢測細胞種屬及交叉污染的試劑組，本發明的目的還在于提供所述試劑組的使用方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種基于LAMP和Multi-LAMP的快速檢測細胞種屬及交叉污染的試劑組，包含下述表1中所示的14種種屬的LAMP引物。

表1. 14種種屬的LAMP引物

進一步地，所述的試劑組還包含不同種屬的DNA。

進一步地，所述的試劑組還包含LAMP反應試劑。所述的LAMP反應試劑包含Bst DNA聚合酶、dNTP、緩沖液。所述的緩沖液優選為含2.5mM Mg²⁺的Tris-HCl緩沖液。

進一步地，所述的試劑組還包括染料。常用于LAMP反應的染料包括孔雀綠、SYBRGreen I、Picogreen、羥基溴酚藍等。更進一步地，所述的染料為孔雀綠。