[發明專利]一種堿性磷酸酶標記物、制備方法、應用及其標記抗體的方法

在審

• 申請號: 202210696869.9
• 申請日: 2022-06-20
• 公開（公告）號: CN115097123A
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發明（設計）人: 石彩娟;蔣明君;林源
• 申請（專利權）人: 四川新健康成生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/577;G01N33/58
• 代理公司: 成都行之智信知識產權代理有限公司 51256
• 代理人: 李瑤

本發明公開了一種堿性磷酸酶標記物、制備方法、應用及其標記抗體的方法，堿性磷酸酶標記物為生物素標記的堿性磷酸酶；用于通過鏈霉親和素?生物素放大反應標記鏈霉親和素標記的抗體，采用發明的堿性磷酸酶標記物及標記方法，可以有效提高堿性磷酸酶的標記量，進一步提高了檢測項目的靈敏度。

技術領域

本發明涉及酶促化學發光檢測技術領域，具體涉及一種堿性磷酸酶標記物、制備方法、應用及其標記抗體的方法。

背景技術

化學發光法具有靈敏度高、線性寬等優勢，但對于某些項目來說靈敏度仍是不夠，本專利提出一種特殊的標記方法可有效提高試劑的靈敏度，該技術幾乎適用于所有項目。

酶促化學發光法，是體外診斷試劑中主流技術，其中以貝克曼為代表的堿性磷酸酶(ALP)和雅培為代表的吖啶酯(AE)是最為廣泛采用的標記物。

現有的堿性磷酸酶(ALP)酶促化學發光法，常用磁微粒和固定抗體連接，檢測抗體(Ab)通過常用交聯劑連接于ALP，兩種抗體識別與待測物的不同抗原位點，形成雙抗體夾心結構，通過磁微粒的固相作用，可進行洗脫多于的復合物之外的成份，最后復合物上的ALP可作用于底物(AMPPD)促進其發光，發光信號的高低反應出待測物的濃度水平。

因此，在標記ALP多采用交聯劑進行橋接的方法，即在檢測抗體的氨基和2IT進行反應，ALP的氨基和琥珀酰亞胺-4-(N-馬來酰亞胺)環已烷-1-1羥酸酯(SMCC)的進行反應，SMCC的基團又和2IT進行交聯，最后，復合物中ALP的多少受限于Ab的氨基數。對于個別要求靈敏度特別高的項目來說達不到要求，如超敏肌鈣、競爭法項目等來說，ALP標記率相對較低，靈敏度不夠。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：現有的抗體標記堿性磷酸酶酶促技術，標記產物中ALP的多少受限于Ab的氨基數，對于個別要求靈敏度特別高的項目來說達不到要求，本發明提供了解決上述問題的一種堿性磷酸酶標記物、制備方法、應用及其標記抗體的方法。

本發明通過下述技術方案實現：

一種堿性磷酸酶標記物，為生物素標記的堿性磷酸酶；用于通過鏈霉親和素-生物素放大反應標記鏈霉親和素標記的抗體。

進一步可選地，所述生物素包括(+)-生物素-N-羥基琥珀酰亞胺酯。

一種堿性磷酸酶標記物的制備方法，將生物素與堿性磷酸酶混合反應，制備獲得上述的一種生物素標記的堿性磷酸酶。

進一步可選地，所述生物素與堿性磷酸酶的摩爾比為10/1～30/1；更優選地為15/1～25/1。

進一步可選地，所述生物素與堿性磷酸酶的摩爾比為20/1。

一種堿性磷酸酶標記物的制備方法，包括以下步驟：

將生物素溶解在有機溶劑中，配制生物素溶液；

對堿性磷酸酶經透析處理后加入生物素溶液，在室溫條件下靜置反應，制備獲得生物素標記的堿性磷酸酶。

進一步可選地，生物素溶液中，生物素的摩爾濃度為6mM～15mM，更優選為10mM。

一種堿性磷酸酶標記物的應用，用于制備堿性磷酸酶酶促化學發光法檢測試劑，或用于堿性磷酸酶酶促化學發光檢測方法中。

一種堿性磷酸酶標記物標記抗體的方法，將生物素標記的堿性磷酸酶與鏈霉親和素標記的抗體混合，通過生物素與鏈霉親和素發生放大反應，實現堿性磷酸酶標記抗體；所述生物素標記的堿性磷酸酶為上述的一種堿性磷酸酶標記物，或者為上述的一種堿性磷酸酶標記物的制備方法制備獲得的生物素標記的堿性磷酸酶。

進一步可選地，生物素標記的堿性磷酸酶與鏈霉親和素標記的抗體兩者的質量比為1:1～3:1。