[發明專利]一種醫學膚用高效承載細胞膜的制備方法

在審

• 申請號: 202210693600.5
• 申請日: 2022-06-18
• 公開（公告）號: CN114854672A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 尚旭;王嫻斌;徐強強
• 申請（專利權）人: 尚旭
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種醫學膚用高效承載細胞膜的制備方法，涉及細胞膜片制備技術領域。本發明一種醫學膚用高效承載細胞膜的制備方法，包括以下步驟：步驟一、制備適合皮膚細胞的培養基；步驟二、皮膚細胞的細胞膜膜片制備前準備；步驟三、皮膚細胞膜片制備。本發明一種醫學膚用高效承載細胞膜的制備方法，通過利用DMEM促進細胞膜片形成的同時，聯合0.25％胰酶促進皮膚細胞分化，使得膜片表面平整，質地均一，細胞外基質含量豐富，厚度大，具備較好抗牽拉特性，不易破裂，具有臨床應用的可操作性；本發明提出的皮膚細胞膜片的制備方法簡單，可以滿足皮膚細胞膜片的制備要求，且完整的保留細胞外基質和細胞間連接，生物相容性好。

技術領域

本發明屬于細胞膜片制備技術領域，特別是涉及一種醫學膚用高效承載細胞膜的制備方法。

背景技術

細胞膜的特殊結構和功能決定了它與現代醫學的密切關系：細胞膜表面含有的糖蛋白能夠特異性的識別外界信號，并通過通道蛋白傳遞信息，引起細胞做出相應的反應；細胞膜是細胞內外物質進行交換的通道，如細胞免疫產生的抗體物質通過膜運輸到細胞外等，研究細胞膜的功能對醫學的發展有重大的意義。

細胞膜是防止細胞外物質自由進入細胞的屏障，它保證了細胞內環境的相對穩定，使各種生化反應能夠有序運行。細胞膜位于細胞表面，厚度通常為7～8nm，由脂類和蛋白質組成。它最重要的特性是半透性，或稱選擇透過性，對進出入細胞的物質有很強的選擇透過性。研究細胞膜能明白許多疾病的發病機理，對指導臨床診斷用藥起著關鍵作用。

現有的皮膚細胞膜片制備存在以下弊端：其一，現有的制備方式容易導致細胞外基質和細胞間連接斷裂，進而導致生物相容性下降；其二是，通過現有的制備方式制備出的膜片表面不平整，且易發生破裂，降低了臨床應用的可操作性，故此，我們提出一種醫學膚用高效承載細胞膜的制備方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種醫學膚用高效承載細胞膜的制備方法，為解決上述技術問題，本發明是通過以下技術方案實現的：

一種醫學膚用高效承載細胞膜的制備方法，包括以下步驟：

步驟一、制備適合皮膚細胞的培養基：向基礎培養基粉末DMEM，加入無菌超純水一部分，進行先溶解，然后根據培養基說明書規定的體積進行定容；充分溶解后，使用0.22微米濾膜進行過濾、封裝；然后按照需求，在基礎培養液中加入5％～15％的血清；

步驟二、皮膚細胞的細胞膜膜片制備前準備：取適量皮膚碎屑，作離心分離20～30分鐘，每分鐘轉速為2600～2800轉，取得固形物，用水使固形物沉渣溶解，取白膜層，置于50ml離心管內，加生理鹽水混勻，將白細胞懸液離心，棄上清液，沉淀用生理鹽水清洗三遍，取培養基將細胞沉淀，然后將最終制備的培養基放置在消毒后的培養皿中，放置于培養箱中培養，待細胞生長旺盛以后，再換成無血清培養液，細胞轉入無血清培養基培養要有一個適應過程，要逐步降低血清濃度，從10％減少到5％，3％，1％，直至無血清培養，在降低過程中要觀察細胞形態是否發生變化，是否有部分細胞死亡，存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性，細胞轉入無血清培養之前，要留有種子細胞，種子細胞按常規培養于含血清的培養基中，以保證細胞的特性不發生變化，待細胞融合度達到要求后，在新的培養皿中進行傳代培養，培養至3～6代；

步驟三、皮膚細胞膜片制備：取3～6代的皮膚細胞經過0.25％胰酶消化，1300轉離心，5分鐘，使用培養基重懸沉淀，吹打均勻；待細胞長至8～12天時，可見用培養基的培養皿底層細胞已形成膜片，膜片的邊緣翹起來，用鑷子可將整張膜片掲起；然后進行膜片的切片、染色和封固。

優選的，所述血清為小牛血清、新牛血清或胎牛血清，胎牛血清取自剖腹產的胎牛，新牛血清取自出生24小時之內的新生牛，小牛血清取自出生10～30天的小牛。

本發明具有以下有益效果：

1、本發明提出的皮膚細胞膜片的制備方法簡單，可以滿足皮膚細胞膜片的制備要求，且完整的保留細胞外基質和細胞間連接，生物相容性好；