[發明專利]一種應用查爾酮還原酶合成二氫查爾酮的方法

在審

• 申請號: 202210672550.2
• 申請日: 2022-06-14
• 公開（公告）號: CN115074398A
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 孫蓮莉;劉洋;張澤昊;曾蘇
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12P7/26
• 分類號: C12P7/26;C12N15/70;C12N15/54;C12N9/10
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 趙杭麗

1.一種應用查爾酮還原酶合成二氫查爾酮的方法，其特征在于，以查爾酮為底物，經酶催化體系催化獲得相應的二氫查爾酮，所述酶催化體系由查爾酮還原酶和輔因子再生系統組成。

2.根據權利要求1所述的一種應用查爾酮還原酶合成二氫查爾酮的方法，其特征在于，通過以下步驟實現：以查爾酮為原料，以NADPH為輔因子，在酶催化體系中的查爾酮還原酶的選擇性還原催化下，還原其碳碳雙鍵生成相應的二氫查爾酮，反應式：

在反應過程中NADPH被氧化成NADP⁺，通過輔因子再生系統將NADP⁺再生為NADPH。

3.根據權利要求1或2所述的一種應用查爾酮還原酶合成二氫查爾酮的方法，其特征在于，查爾酮還原酶來源于植物紫花苜蓿(Medicago sativa)，編碼查爾酮還原酶的核苷酸序列如SEQ.No.1所示，其氨基酸序列如SEQ.No.2所示。

4.根據權利要求1或2所述的一種應用查爾酮還原酶合成二氫查爾酮的方法，其特征在于，所述輔因子再生系統為：以葡萄糖脫氫酶為輔因子再生酶、以葡萄糖為輔因子再生底物、并包含NADP⁺。在NADP⁺的存在下，葡萄糖脫氫酶將葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并生成NADPH，而生成的NADPH作為輔因子，參與查爾酮還原酶催化查爾酮雙鍵還原的反應，生成二氫查爾酮和NADP⁺，而NADP⁺進一步參與葡萄糖氧化反應，進一步循環獲得NADPH，反應式如下：

5.根據權利要求1或2所述的一種應用查爾酮還原酶合成二氫查爾酮的方法，其特征在于，所述酶催化體系包括查爾酮還原酶、葡萄糖脫氫酶、葡萄糖和微量NADP⁺，所述酶催化體系中查爾酮還原酶和輔因子再生酶均純化后為游離純酶。

6.根據權利要求5所述的一種應用查爾酮還原酶合成二氫查爾酮的方法，其特征在于，所述葡萄糖脫氫酶來源于巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)IAM1030的葡萄糖脫氫酶。

7.根據權利要求1或2所述的一種應用查爾酮還原酶合成二氫查爾酮的方法，其特征在于，酶催化體系中，所述查爾酮還原酶和葡萄糖脫氫酶的添加量均為0.1～5mg/ml。

8.根據權利要求1或2所述的一種應用查爾酮還原酶合成二氫查爾酮的方法，其特征在于，酶催化體系中，底物潛手性酮的添加量為0.1～15mM；輔因子再生底物的添加量為0.15～20mM，反應溫度為20～45℃，反應時間為0.5～24h。

9.根據權利要求1或2所述的一種應用查爾酮還原酶合成二氫查爾酮的方法，其特征在于，控制反應的pH值為6～9。