[發明專利]一種非創傷紫奇楠實生苗快速結香的內生菌、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202210664713.2
• 申請日: 2022-06-14
• 公開（公告）號: CN115305206A
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 楊敦階
• 申請（專利權）人: 楊敦階
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01G7/06;A01N63/30;A01P21/00;C12R1/645
• 代理公司: 重慶輝騰律師事務所 50215
• 代理人: 王海軍

1.一種非創傷紫奇楠實生苗快速結香的內生菌，其特征在于：內生菌的保藏號為：CGMCC No.40065；分類命名為:假可可毛色二孢Lasiodiplodia pseudotheobromae。

2.一種非創傷紫奇楠實生苗快速結香的內生菌的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)制備奇楠沉香粉；

2)超聲提取奇楠沉香粉，過濾提取液，得到內生菌混合液；

3)將內生菌液混合液置于固體培養基上培養，選菌得到內生菌種子液；

4)將內生菌種子液置于液體發酵罐內發酵，液體培養基采用分批補料的方式加入發酵罐中,前5天控制發酵罐內磷濃度為0.03-0.06g/L，5天后控制磷源小于0.01g/L再2培養2天，得到內生菌發酵液；

5)將內生菌發酵液稀釋離心，得到非創傷紫奇楠實生苗快速結香的內生菌菌液。

3.權利要求2所述的非創傷紫奇楠實生苗快速結香的內生菌的制備方法，特征在于：步驟1)所述的奇楠沉香粉的制備方法為：奇楠所產沉香經刨片機刨成小于1毫米的薄片、在60mg/L濃度的臭氧中消毒2小時，在無菌環境中用萬能粉碎機粉碎過0.5mm篩后在液氮冷凍研磨機冷凍10分鐘，粉碎4分鐘，得到預處理奇楠沉香粉。

4.權利要求2所述的非創傷紫奇楠實生苗快速結香的內生菌的制備方法，特征在于：所述固體培養基的配方為：麩皮40％、豆餅粉30％、紫奇楠白木15％、玉米碎粒15％，外加組分和接種量(/kg基質)為蔗糖5g、蛋白胨15g、NH₄NO₃3.00 g、KH₂PO₄3 g、CaSO₄ 3g、MgSO₄1g，維生素PP10mg、蒸餾水500g。

5.權利要求2所述的非創傷紫奇楠實生苗快速結香的內生菌的制備方法，特征在于：所述液體為牛肉蛋白胨8-10g,酵母粉1.5-3g,葡萄糖4-6g,K₂HPO₄ 0.2-0.3g,蟻酸0.1-0.2g,CaSO₄0.5g，FeSO₄ 0.05g,MgSO₄,0.05g，NaCl 0.05g,無菌水1L。

6.非創傷紫奇楠實生苗快速結香的內生菌在紫奇楠實生苗非創傷的條件下誘導快速結香。

7.根據權利要求所述的非創傷紫奇楠實生苗快速結香的內生菌在紫奇楠實生苗非創傷的條件下誘導快速結香，其特征在于：將奇楠內生菌注射液通過專用奇楠內生菌注射裝置注射到一年生以上紫奇楠實生苗中，經過兩年可達到整株結香。