[發明專利]鼠IgM類單克隆抗體及親和純化試劑

在審

• 申請號: 202210660178.3
• 申請日: 2022-06-13
• 公開（公告）號: CN115181184A
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 嚴兵;彭璐;舒晏妮;肖慶紅;申佳美
• 申請（專利權）人: 武漢科源安博生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;C12N15/13;C07K16/00;C07K1/22;B01D15/38;B01D15/42
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 黃韌敏

本發明提供兔抗鼠IgM的單克隆抗體和相應的親和純化試劑。所述單克隆抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區序列如SEQ ID NO.2所示，所述輕鏈可變區序列如SEQ ID NO.3所示。本發明獲得了親和力高、特異性好的兔單克隆抗體，由此制備的免疫吸附劑純化效果很好。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及用于親和純化的鼠IgM類單克隆抗體。

本發明也涉及含有所述單克隆抗體的親和純化試劑。

背景技術

鼠IgM類單克隆抗體可分為含J鏈的五聚體(可結合10個抗原)和不含J鏈的六聚體蛋白(可結合12個抗原)。IgM類單克隆抗體有多價的抗原結合能力，因此與IgG相比，它有更高的親和力，在診斷學中有一定的優勢。然而，IgM類單克隆抗體的純化一直是比較頭疼的一個問題。目前，市面尚無針對鼠IgM類單克隆抗體的純化試劑，因為IgM類單克隆抗體無法結合ProteinA，因此，無法利用傳統純化IgG的方法純化，另外，IgM抗體溶解性范圍比較窄，所以抗體的純化比較困難。早期的IgM抗體純化基本上都是通過等電點沉淀并結合凝膠色譜柱進行純化，IgM抗體還可用分子篩的方式進行純化，但純度及活性不一。利用兔抗鼠IgMμ鏈蛋白單克隆抗體偶聯瓊脂糖凝膠的親和純化試劑并未見。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一種針對鼠IgM類抗體的兔單克隆抗體。

本發明的另一個目的在于一種針對鼠IgM類抗體的親和純化試劑。

根據本發明的一個方面，本發明提供針對兔抗鼠IgMμ鏈蛋白的單克隆抗體。

通過合成的鼠IgMμ鏈蛋白免疫家兔，家兔血清效價經檢測其滴度達一百萬以上，取家兔外周血，隨后分離白細胞，通過鼠IgMμ鏈蛋白偶聯的磁珠特異性篩選陽性克隆細胞，然后培養。通過鼠IgM單抗包板ELISA板，加培養的兔細胞表達上清，最后加鼠抗兔IgG-HRP進行細胞的篩選，從而篩選出針對鼠IgMμ鏈蛋白的強陽性單克隆抗體細胞株。最后將這些選出來的陽性細胞進行復測，通過添加3M MgCl₂來破壞細胞表達上清中兔單抗與鼠IgM單抗的特異性結合，從而篩選出既可與鼠IgM單抗特異性結合，又可被3M MgCl₂洗脫的陽性單克隆抗體細胞株，最終實現鼠IgM單抗的特異性親和純化試劑。

經過篩選，獲得一株分泌單克隆抗體的細胞株命名為3C5，對此細胞株進行測序，得到此單克隆抗體重鏈可變區與輕鏈可變區的序列，分別如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，最終構建重鏈與輕鏈表達載體。將構建的重鏈、輕鏈表達載體轉化DH5α細胞，實現載體的長期保存。

培養293F細胞，轉染上述3C5細胞株的輕鏈與重鏈表達載體，表達兔單克隆抗體，純化并鑒定活性。

根據本發明的又一方面，本發明提供針對鼠IgM類單抗的親和純化試劑，由上述所得兔單克隆抗體偶聯瓊脂糖凝膠產生。

根據本發明的再一方面，提供一種純化IgM類單克隆抗體的方法，包含下述步驟：

1)提供瓊脂糖-抗體偶聯物，所述抗體為權利要求1所述的單克隆抗體；

2)將待純化的IgM類單克隆抗體與步驟1)所述的瓊脂糖-抗體偶聯物接觸；

3)洗脫并收集目的蛋白。

優選地，所述的方法中，步驟3)所述洗脫中，洗脫液含MgCl₂。

因為鼠IgM類單抗純化后活性與得率較難穩定，本發明制備的兔抗鼠IgMμ鏈蛋白的兔單克隆抗體親和純化試劑則可以較好的解決這個問題，本發明的親和純化試劑可用于純化鼠IgM類單抗，使得鼠IgM類單抗純化變得更加方便快捷。

附圖說明

圖1為載體表達后Western Blotting驗證結果，其中：