[發(fā)明專利]一種提高病毒包裝產(chǎn)量的293T細(xì)胞株構(gòu)建方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210657839.7
• 申請日: 2022-06-10
• 公開（公告）號: CN114958916A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉登輝;施榮輝;雍金貴
• 申請（專利權(quán)）人: 通用生物（安徽）股份有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/867;C12N5/10;C12N15/12
• 代理公司: 合肥正則元起專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34160
• 代理人: 劉培越

1.一種提高病毒包裝產(chǎn)量的293T細(xì)胞株構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：設(shè)計(jì)并合成靶向Tetherin基因的靶點(diǎn)序列并構(gòu)建Tetherin-sgRNA CRISPR基因編輯質(zhì)粒；

步驟二：利用Tetherin-sgRNA CRISPR基因編輯質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞；

步驟三：通過嘌呤霉素篩選獲得Tetherin基因敲除的單克隆細(xì)胞株；

步驟四：病毒包裝。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高病毒包裝產(chǎn)量的293T細(xì)胞株構(gòu)建方法，其特征在于，用Tetherin基因設(shè)計(jì)用于Tetherin-sgRNA CRISPR基因編輯質(zhì)粒的靶點(diǎn)序列為：

①CGCTTATCCCCGTCTTCCATGGG；

②CCCCCAGAATCACGATGATCAGG；

③TGCCCGAAGGCCGTCCCGGCAGG。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種提高病毒包裝產(chǎn)量的293T細(xì)胞株構(gòu)建方法，其特征在于，根據(jù)靶點(diǎn)序列設(shè)計(jì)復(fù)合載體克隆位點(diǎn)需求的oligo，序列信息如下：

①Tetherin-sgRNA1-F：ACCGCGCTTATCCCCGTCTTCCATGGG

Tetherin-sgRNA1-R：AAACCCCATGGAAGACGGGGATAAGCG

②Tetherin-sgRNA2-F：ACCGCCCCCAGAATCACGATGATCAGG

Tetherin-sgRNA2-R：AAACCCTGATCATCGTGATTCTGGGGG

③Tetherin-sgRNA3-F：ACCGTGCCCGAAGGCCGTCCCGGCAGG

Tetherin-sgRNA3-R：AAACCCTGCCGGGACGGCCTTCGGGCA。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高病毒包裝產(chǎn)量的293T細(xì)胞株構(gòu)建方法，其特征在于，步驟三中所述嘌呤霉素的濃度為2ug/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高病毒包裝產(chǎn)量的293T細(xì)胞株構(gòu)建方法，其特征在于，步驟四中選用VP012-U6-MCS-CMV-ZsGreen慢病毒進(jìn)行包裝。

6.包含權(quán)力要求1所述的一種提高病毒包裝產(chǎn)量的293T細(xì)胞株構(gòu)建方法所構(gòu)建的293T細(xì)胞株在重組病毒中的應(yīng)用。

7.包含權(quán)力要求1所述一種提高病毒包裝產(chǎn)量的293T細(xì)胞株構(gòu)建方法所構(gòu)建的293T細(xì)胞株在重組蛋白表達(dá)中的作用。