[發(fā)明專利]用于檢測(cè)香杏麗蘑和雙孢蘑菇的引物探針組合及檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210657060.5
• 申請(qǐng)日: 2022-06-10
• 公開（公告）號(hào): CN114854899B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭梁;徐偉良;李春冬;李鳳忠;劉國(guó)強(qiáng);羅建興;烏仁圖雅;木其勒;特格希巴雅爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 錫林郭勒職業(yè)學(xué)院;錫林郭勒盟坤源生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 成都方圓聿聯(lián)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51241
• 代理人: 李鵬

1.用于檢測(cè)香杏麗蘑和雙孢蘑菇的引物探針組合，其特征在于，包括正反向引物、香杏麗蘑探針、雙孢蘑菇探針和質(zhì)控探針；所述正反向引物的序列如SEQ?ID?No.1和SEQ?IDNo.2所示；所述香杏麗蘑探針、雙孢蘑菇探針和質(zhì)控探針的序列依次如SEQ?ID?No.3-SEQID?No.5所示；

以所述引物探針組合，進(jìn)行Real-time?PCR擴(kuò)增，所述Real-time?PCR擴(kuò)增的參數(shù)為：預(yù)變性溫度94℃，30s，變性溫度94℃，5s，退火延伸溫度60℃，31s，40個(gè)循環(huán)；

所述Real-time?PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系為：Probe?qPCR預(yù)混液10μL、待測(cè)蘑菇樣品DNA模板2μL，滅菌的去離子水4.5μL；正反向引物各1μL，濃度均為10μmol/L；香杏麗蘑探針、雙孢蘑菇探針和質(zhì)控探針各0.5μL，濃度均為10μmol/L；體系總體積20μL；

根據(jù)PCR擴(kuò)增曲線對(duì)待測(cè)蘑菇樣品中香杏麗蘑和雙孢蘑菇的DNA含量進(jìn)行定性定量檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物探針組合，其特征在于，所述香杏麗蘑探針、雙孢蘑菇探針和質(zhì)控探針的5'端修飾有報(bào)告基團(tuán)，3'端修飾有淬滅基團(tuán)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的引物探針組合，其特征在于，所述報(bào)告基團(tuán)為FAM、HEX、ROX或CY5中的一種；所述淬滅基團(tuán)為TAMRA、MGB、BHQ1或BHQ2中的一種。