[發(fā)明專(zhuān)利]編碼人OTOF的核酸序列及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210644382.6
• 申請(qǐng)日: 2022-06-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114854762A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-08-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高凱瑜;趙紫維;李碧君
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海鼎新基因科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/12
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/12;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明提供了OTOF編碼優(yōu)化序列，通過(guò)優(yōu)化序列在細(xì)胞中的表達(dá)效果比天然OTOF序列提高3倍以上。此編碼優(yōu)化序列可用于蛋白的表達(dá)及病毒包裝。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因治療領(lǐng)域，編碼人OTOF蛋白的核酸序列，相比于OTOF的天然序列，能夠顯著提高OTOF的表達(dá)量。

背景技術(shù)

耳是人體的重要器官，由外耳、中耳和內(nèi)耳構(gòu)成，其主要功能是感知聲音和維持身體平衡。當(dāng)耳功能異常時(shí)會(huì)導(dǎo)致一系列身體機(jī)能的病變，包括耳聾，耳鳴，眩暈等。

耳聾是一種聽(tīng)覺(jué)功能異常的常見(jiàn)疾病，可分為先天性耳聾和后天性耳聾，多與遺傳因素和環(huán)境因素相關(guān)。每1000個(gè)新生嬰兒中就有2位先天性耳聾，其中50-60%患者的耳聾均由基因突變引起；基因突變導(dǎo)致的耳聾可分為顯性基因突變和隱性基因突變。其中，隱性耳聾基因包括CLDN14，PJVK，GRXCR1，MYO7A，MYO6，MYO3A，MYO15A，OTOF，OTOG，OTOA，STRC，TMC1，SLC22A4，SLC26A4，SLC26A5，TECTA，GJB2和GJB6等。這些耳聾基因的發(fā)現(xiàn)為遺傳性耳聾的精準(zhǔn)治療提供潛在的靶點(diǎn)，因此當(dāng)上述基因引發(fā)耳聾時(shí)，基因治療可以作為耳聾根治的首選策略。

其中，OTOF在聽(tīng)力中發(fā)揮了重要作用。OTOF蛋白主要表達(dá)在耳蝸的內(nèi)耳毛細(xì)胞中，主要作用是結(jié)合鈣離子（Ca²⁺），并啟動(dòng)下游神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。OTOF基因的缺失或功能喪失性突變會(huì)引起DFNB9耳聾。

通過(guò)過(guò)表達(dá)正常功能的OTOF蛋白來(lái)恢復(fù)OTOF突變引起的耳聾是目前治療OTOF突變耳聾的主要思路，但其中會(huì)遇到表達(dá)效率低的問(wèn)題。為了提高OTOF的表達(dá)效率，本發(fā)明提供了OTOF的優(yōu)化序列，使得OTOF蛋白表達(dá)量提升3倍以上。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了編碼人OTOF的核酸序列，相比于天然OTOF序列的蛋白表達(dá)量有顯著提升。

該序列可以以DNA的形式構(gòu)建到蛋白表達(dá)質(zhì)粒中，在相適應(yīng)的宿主中進(jìn)行蛋白表達(dá)，包括大腸桿菌；昆蟲(chóng)細(xì)胞；哺乳動(dòng)物細(xì)胞系 ，包括但不限于CHO，HEK-293T，HEK-293FT等。

該序列可以以DNA的形式構(gòu)建到病毒包裝載體中，包括但不限于腺相關(guān)病毒，腺病毒及慢病毒等。

該序列可以以RNA的形式制備并包裹到脂質(zhì)納米顆粒中。

附圖說(shuō)明：

圖1 OTOF-Opt圖譜；

圖2 OTOF-Nat圖譜；

圖3 OTOF蛋白的表達(dá)；

圖4 蛋白表達(dá)的定量分析的結(jié)果;

具體實(shí)施方式：

為了使本申請(qǐng)的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本申請(qǐng)進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅用以解釋本專(zhuān)利，并不用于限定本發(fā)明。

本發(fā)明涉及OTOF核苷酸序列，通過(guò)該核苷酸序列翻譯得到的蛋白質(zhì)與Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)Q9HC10-5相同。

該核苷酸具體的應(yīng)用包括：

該序列可以以DNA的形式構(gòu)建到蛋白表達(dá)質(zhì)粒中，在相適應(yīng)的宿主中進(jìn)行蛋白表達(dá)，包括大腸桿菌；昆蟲(chóng)細(xì)胞；哺乳動(dòng)物細(xì)胞系 ，包括但不限于CHO，HEK-293T，HEK-293FT等。