[發(fā)明專利]一種檢測GJB2耳聾基因c.188delT突變位點的引物探針組合及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210641696.0
• 申請日: 2022-06-07
• 公開（公告）號: CN115433772A
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 顧潔;袁嬌;郭翠;趙娟萍;戴國華;王麗穎
• 申請（專利權(quán)）人: 顧潔
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 劉璞

1.一種檢測GJB2耳聾基因c.188delT突變位點的組合物，其特征在于，包括以下引物和探針；

GJB2:c.188delT上游引物：5'-GAGCAGGCCGACTTTGTCTGC-3'；

GJB2:c.188delT下游引物：5'-TGATCTTCGTGTCCACGCCAGC-3'；

野生型探針：5'-AGGCTGCAAGAACATGTGCTAC-3'；

突變型探針：5'-AGGCTGCAAGAACAGTGCTAC-3'。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測GJB2耳聾基因c.188delT突變位點的組合物，其特征在于，所述野生型探針、突變型探針的5’端設(shè)有熒光基團，在3’端或距離5’端8～12個堿基的位置設(shè)有淬滅基團；

優(yōu)選的，在3’端或距離5’端10個堿基的位置設(shè)有淬滅基團；

優(yōu)選的，在距離5’端8～12個堿基的位置設(shè)有淬滅基團。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述檢測GJB2耳聾基因c.188delT突變位點的組合物，其特征在于，所述野生型探針的熒光基團為FAM、VIC、ROX、HEX或Cy5，標記在5’端，淬滅基團為BHQ。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述檢測GJB2耳聾基因c.188delT突變位點的組合物，其特征在于，所述突變型探針的熒光基團為FAM、VIC、ROX、HEX或Cy5，淬滅基團為BHQ。

5.一種檢測GJB2耳聾基因c.188delT突變位點的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1-4任一項所述檢測GJB2耳聾基因c.188delT突變位點的組合物；

優(yōu)選的，還包括(NH₄)₂SO₄，更優(yōu)選(NH₄)₂SO₄在PCR反應(yīng)液中的終濃度為100～200μM。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述檢測GJB2耳聾基因c.188delT突變位點的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括GJB2:c.188delT上游引物、GJB2:c.188delT下游引物、野生型探針、突變型探針、10×Ex Taq Buffer、(NH₄)₂SO₄、dNTPs、Ex Taq HS、超純水；

優(yōu)選的，GJB2:c.188delT上游引物在PCR反應(yīng)液中的終濃度為150～200nM、GJB2:c.188delT下游引物為150～200nM、野生型探針為150～200nM、突變型探針為150～200nM、(NH₄)₂SO₄為100～200μM、dNTPs為100～200μM。

7.一種檢測GJB2耳聾基因c.188delT突變位點的方法，其特征在于，針對待測樣品，利用權(quán)利要求1-4任一項所述檢測GJB2耳聾基因c.188delT突變位點的組合物或權(quán)利要求5-6任一項所述檢測GJB2耳聾基因c.188delT突變位點的試劑盒進行實時熒光PCR檢測，根據(jù)PCR檢測結(jié)果判定基因型別；

優(yōu)選的，所述待測樣品為DNA樣本，PCR反應(yīng)體系中，DNA樣本與PCR反應(yīng)液的體積比為2:18；

優(yōu)選的，用于檢測的PCR反應(yīng)程序為：95℃，5～10分鐘，1個循環(huán)；95℃，5～15秒，60℃，30～60秒，5～10個循環(huán)；95℃，5～15秒，60℃，30～60秒，25～30個循環(huán)，收集熒光。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述檢測GJB2耳聾基因c.188delT突變位點的方法，其特征在于，通過實時熒光PCR擴增，獲得熒光信號的Ct值，通過比較不同熒光信號的Ct值，判斷目標基因位點是否存在擴增，從而判斷基因型別。