[發(fā)明專利]一種山羊PIS基因型檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210638902.2
• 申請(qǐng)日: 2022-06-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114990111A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李和剛;都萌萌;林曉坤;張權(quán)威;程明;趙金山
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12Q1/6816;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 孫光遠(yuǎn)

1.一種山羊PIS基因型檢測(cè)引物、探針組，其特征在于，包括：4對(duì)特異性引物：SRY F和SRY R；PIS wt F和PIS wt R；PIS var-1 F和PIS var-1 R；PIS var-2 F和PIS var-2 R；探針；

SRY F：5’-GGGGCAATCGTATGCTTCT-3’如SEQ ID No.1所示；

SRY R：5’-CGGGTATTTGTCTCGGTGT-3’如SEQ ID No.2所示；

PIS wt F：5’-CTTGTGCCTCTTAGTCCTG-3’如SEQ ID No.5所示；

PIS wt R：5’-ACATAGAATGCCCTGGTG-3’如SEQ ID No.6所示；

PIS var-1 F：5’-ATTTGCTGGCGTATTGAGTG-3’如SEQ ID No.7所示；

PIS var-1 R：5’-AAGACGGTAGGTTCTGTGGG-3’如SEQ ID No.8所示；

PIS var-2 F：5’-TCATAGGCCATAGCTAAATGGT-3’如SEQ ID No.9所示；

PIS var-2 R：5’-GAGACAGGCTGAATGTGCAA-3’如SEQ ID No.10所示；

探針：5’-TCATAGGCCATAGCTAAATGGTACTTAGAGAAATTTTTATAGATTTAAATACATTCATCAGACTACAAATGAAGTGTAGGCATTAAAATTAAGAAACTTGAAGAATGTGTATGTACTTCCAAAGCAAAAATAAGAAAAATAAGGGTATAACTCGCTTCTAGGGACTCAGGGGCAGTCTAATTTTCAAGCACTGAGAAGCCCAGATTAGTCTAATCAGTGCAAGCCTGTCTTTCAGTCCATTTAAAGATCCTTTGCACATTCAGCCTGTCTC-3’如SEQ ID No.11所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種山羊PIS基因型檢測(cè)引物、探針組，其特征在于，還包括特異性引物對(duì)GAPDH F和GAPDH R；

GAPDH F：5’-GTTTGTGATGGGCGTGAA-3’如SEQ ID No.3所示；

GAPDH R：5’-CTGTTGCTGTAGCCGAAT-3’如SEQ ID No.4所示。

3.一種基于權(quán)利要求1或2所述檢測(cè)引物、探針組的試劑盒。

4.一種基于權(quán)利要求1或2所述檢測(cè)引物、探針組或權(quán)利要求3所述的試劑盒在畜牧養(yǎng)殖中的應(yīng)用。

5.一種基于權(quán)利要求2所述檢測(cè)引物、探針組的山羊PIS基因型檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)引物設(shè)計(jì)：包括遺傳性別判定引物和PIS基因型鑒定引物；

(2)進(jìn)行遺傳性別和PIS基因型鑒定；

(3)制備探針并進(jìn)行Southern雜交檢測(cè)。

6.如權(quán)利要求5所述的山羊PIS基因型檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)包括：樣本基因組DNA的提取；遺傳性別鑒定引物SRY-F/R、GAPDH-F/R的PCR擴(kuò)增；PIS基因型鑒定引物PISwt F/R、PIS var-1F/R的PCR擴(kuò)增；所述擴(kuò)增采用25μL體系：1.1×Golden Star Super PCRMix 22μL，模板DNA 1μL，上下游引物各1μL；反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性5min，95℃變性30s，退火30s，72℃延伸30s，循環(huán)34次，72℃復(fù)性5min，4℃保存。