[發明專利]一種基于分子探針技術制備乳清蛋白-咖啡酸結合物的方法

在審

• 申請號: 202210634007.3
• 申請日: 2022-06-07
• 公開（公告）號: CN114805385A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 唐長波;靳爽爽;楊粉紅;郭赟;王嘉櫟
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C07D495/04
• 分類號: C07D495/04;G01N27/447
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 競存;徐冬濤

1.一種咖啡酸-生物素小分子探針，其特征在于，所述小分子探針的結構如式1所示，

2.權利要求1所述咖啡酸-生物素小分子探針的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

S1：將式2所示化合物、式3所示化合物溶于有機溶劑A中；

室溫下加入有機溶劑B、有機溶劑C，反應攪拌；將反應液加入到甲基叔丁基醚中析出中間產物A，用硅膠柱純化，再用二氯甲烷和石油醚重結晶得到式4所示化合物；

優選的，甲基叔丁基醚與式2所示化合物的比例為54.1-57.1mL/g；

進一步優選的，甲基叔丁基醚與式2所示化合物的比例為55.6mL/g；

式2所示化合物為

式3所示化合物為

式4所示化合物為

S2：將式4所示化合物溶于二氯甲烷；冰浴下加入鹽酸-甲醇溶液，反應攪拌；濃縮反應液得到式5所示化合物；式5所示化合物為

優選的，式4所示化合物在二氯甲烷中的濃度為62.5-65.5mg/mL；

進一步優選的，式4所示化合物在二氯甲烷中的濃度為64mg/mL；

S3：將式5所示化合物、式6所示化合物溶于有機溶劑A中；室溫下加入有機溶劑B、有機溶劑C，反應攪拌；將反應液加入到甲基叔丁基醚中析出中間產物B；用硅膠柱純化，再用二氯甲烷和乙酸乙酯重結晶得到式1示化合物；

式6示化合物為

式1示化合物為

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，S1中所述式2所示化合物與式3所示化合物的質量比為7.5：6.5-10.5：9.5，優選的，S1中所述式2所示化合物與式3所示化合物的質量比為9：8。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，S1、S3中，所述有機溶劑A為二甲基甲酰胺(DMF)，

所述式2所示化合物在有機溶劑A中的濃度為70.5-73.5mg/mL，優選的，所述式2所示化合物在有機溶劑A中的濃度為72mg/mL；

式5所示化合物在有機溶劑A中的濃度為42.5-45.5mg/mL，優選的，式5所示化合物在有機溶劑A中的濃度為44mg/mL；

式6所示化合物在有機溶劑A中的濃度為46.5-49.5mg/mL，優選的，式6所示化合物在有機溶劑A中的濃度為48mg/mL；

所述有機溶劑B為碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)，

S1中有機溶劑B與式2所示化合物的質量比為1.7：1.5-4.7：4.5，優選的，S1中有機溶劑B與式2所示化合物的質量比為3.2：3；

S1中有機溶劑B與式3所示化合物的質量比為4.5：3.5-7.5：6.5，優選的，S1中有機溶劑B與式3所示化合物的質量比為6：5；

S3中有機溶劑B與式5所示化合物的質量比為3.3：4-6.3：7，優選的，S3中有機溶劑B與式5所示化合物的質量比為4.8：5.5；

S3中有機溶劑B與式6所示化合物的質量比為2.5：3.5-5.5：6.5，優選的，S3中有機溶劑B與式6所示化合物的質量比為4：5；

所述有機溶劑C為4-二甲氨基吡啶(DMAP)，

S1中有機溶劑C與式2所示化合物的質量為0.4：8.79-0.82：9.21，優選的，S1中有機溶劑C與式2所示化合物的質量為0.61：9；

S1中有機溶劑C與式2所示化合物的質量為0.4：7.79-0.82：8.21，優選的，S1中有機溶劑C與式2所示化合物的質量為0.61：8；

S3中有機溶劑C與式5所示化合物的質量比為0.4：10.79-0.82：11.21，優選的，S3中有機溶劑C與式5所示化合物的質量比為0.61：11

S3中有機溶劑C與式6所示化合物的質量比為0.4：11.79-0.82：12.21，優選的，S3中有機溶劑C與式6所示化合物的質量比為0.61：12。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，S1中，所述硅膠柱試劑體積比為二氯甲烷：甲醇＝20:1；S3中，所述硅膠柱試劑體積比為二氯甲烷：甲醇＝10：1。