[發明專利]一種用于激活休眠腫瘤細胞的SETD4蛋白抑制劑的投遞蛋白

在審

• 申請號: 202210632886.6
• 申請日: 2021-05-26
• 公開（公告）號: CN115025223A
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 楊衛軍;楊堯順
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K45/00
• 分類號: A61K45/00;A61K9/127;A61K9/14;A61K38/16;A61K47/24;A61K47/28;A61K47/46;A61K47/34;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種用于激活休眠腫瘤細胞的SETD4蛋白抑制劑的投遞蛋白，其特征在于所述投遞蛋白包括投遞DEK蛋白，所述投遞DEK蛋白為含有DEK蛋白的醫學可接受的載體。

2.如權利要求1所述的投遞蛋白，其特征在于所述載體包括外泌體、脂質體或納米材料。

3.如權利要求1所述的投遞蛋白，其特征在于所述DEK蛋白具有SEQ ID NO.25所示保守序列。

4.如權利要求3所述的投遞蛋白，其特征在于所述DEK蛋白具有SEQ ID NO.2所示NLS結構域的氨基酸序列95％以上相似性。

5.如權利要求3所述的投遞蛋白，其特征在于所述DEK蛋白具有SEQ ID NO.3所示SAP結構域的氨基酸序列95％以上相似性。

6.如權利要求3所述的投遞蛋白，其特征在于所述DEK蛋白具有SEQ ID NO.4所示pseudo-SAP結構域的氨基酸序列95％以上相似性。

7.如權利要求3所述的投遞蛋白，其特征在于所述DEK蛋白具有SEQ ID NO.4所示pseudo-SAP結構域或SEQ ID NO.3所示SAP結構域中的一種或兩種，且同時具有SEQ IDNO.2所示NLS結構域。

8.如權利要求3-7之一所述的投遞蛋白，其特征在于所述DEK蛋白具有SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.22所示氨基酸序列95％以上相似性。

9.如權利要求8所述的投遞蛋白，其特征在于所述DEK蛋白具有SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。

10.如權利要求8所述的投遞蛋白，其特征在于所述DEK蛋白具有SEQ ID NO.22所示氨基酸序列。

11.如權利要求2所述的投遞蛋白，其特征在于所述載體為外泌體時，所述投遞DEK蛋白是由腫瘤細胞系培養液中分離獲得含有DEK蛋白的外泌體，或將DEK蛋白編碼基因接入基因表達載體，在細胞系中過量表達DEK蛋白并產生含有DEK蛋白的外泌體。

12.如權利要求11所述的投遞蛋白，其特征在于所述將DEK蛋白編碼基因接入基因表達載體獲得含DEK蛋白的外泌體按如下方法之一制備：(1)構建過表達DEK蛋白的質粒并將其轉染到細胞系中制備外泌體：將DEK基因插入到pEGFP-C1質粒的EcoRⅠ和XbaⅠ位點上，篩選獲得重組質粒pEGFP-C1-DEK；利用脂質體助轉劑lipo8000將上述重組質粒轉入細胞系中，過量表達DEK蛋白后收集細胞培養液，從培養液中分離純化含有DEK蛋白的外泌體溶液A；(2)構建過表達DEK蛋白的慢病毒并將其感染細胞系構建表達DEK蛋白的細胞株制備外泌體：將DEK基因分別插入到pLent-N-GFP的慢病毒表達載體的EcoRⅠ和XbaⅠ位點上，篩選獲得重組慢病毒表達載體pLent-N-GFP-DEK；將上述重組慢病毒表達載體和慢病毒包裝質粒混合物共同轉染293T細胞，轉染72小時后收集細胞培養上清即為病毒液，濃縮純化，獲得過表達DEK蛋白的慢病毒；用過表達DEK蛋白的慢病毒感染細胞系并構建過表達DEK蛋白的細胞株；收集過表達DEK蛋白的細胞株中的細胞培養液，從培養液中分離純化含有DEK蛋白的外泌體溶液B；所述慢病毒包裝質粒混合物為質量比5:3:2的pMDL、VSVG和pRSV-Rev。

13.如權利要求11所述的投遞蛋白，其特征在于所述細胞系包括乳腺癌、肺癌、胃癌、前列腺癌或宮頸癌。