[發(fā)明專利]一種用于多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的診療納米復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210630736.1
• 申請(qǐng)日: 2022-06-06
• 公開（公告）號(hào): CN114983932A
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王悍;賀美娟;史向陽;肖婷婷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市第一人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K9/06
• 分類號(hào): A61K9/06;A61K39/39;A61K33/32;A61K47/32;A61K49/12;A61K49/18;A61P35/00
• 代理公司: 上海卓陽知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種用于多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的診療納米復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用。其制備方法為：將沉淀聚合方法制備的PVCL.COOH NGs與過量的乙二胺反應(yīng)，通過EDC/NHS偶聯(lián)反應(yīng)使PVCL NGs表面的羧基轉(zhuǎn)化為氨基，隨后利用NGs胺基團(tuán)和高錳酸鹽之間的氧化還原反應(yīng)得到PVCL?MnO₂ NGs。最后，通過物理封裝將免疫佐劑CpG ODNs加載到PVCL?MnO₂ NGs上獲得PVCL?MnO₂?CpG，實(shí)現(xiàn)MRI引導(dǎo)下的多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的放療聯(lián)合免疫治療，在腫瘤免疫治療領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是一種用于多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的診療納米復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(Glioblastoma multiforme,GBM)是最具侵襲性的惡性腦癌，其發(fā)病率為3/10萬，5年生存率低于10％。放療是改善GBM臨床癥狀和提高其生存率的不可或缺的方式。然而，放療依舊存在一定的局限性，不可避免的副作用，放療抵抗的腫瘤微環(huán)境以及免疫抑制細(xì)胞的存在，使得放療并不能取得較好的成效，實(shí)現(xiàn)對(duì)GBM的完全根治。目前針對(duì)膠質(zhì)瘤的綜合治療方法主要包括手術(shù)切除腫瘤聯(lián)合放療或替莫唑胺(temozolomide,TMZ)化療，但患者的總生存時(shí)間并未得到明顯改善，仍少于15個(gè)月。因此，亟需找到能夠提升基于放療的抗GBM治療效果的方法。

近年來，免疫療法的出現(xiàn)為腫瘤的治療提供了新的思路，其中放療聯(lián)合免疫治療的協(xié)同作用引起了廣泛的關(guān)注。放療產(chǎn)生的DNA損傷可以被抗原提呈細(xì)胞(antigen-presenting cells,APCs)所識(shí)別，APCs將這些損傷片段提呈給淋巴細(xì)胞，促進(jìn)淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生與增殖。目前,樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DCs)被認(rèn)為是最強(qiáng)大且最重要的APCs。成熟DCs表面分子的表達(dá)不會(huì)受膠質(zhì)瘤細(xì)胞的影響,且活化的DCs與膠質(zhì)瘤預(yù)后呈正相關(guān)。此外,DNA損傷可以通過環(huán)GMP-AMP合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)/干擾素基因刺激劑(stimulator of interferon genes,STING)信號(hào)的激活，促進(jìn)I型干擾素(type-Iinterferons,IFN-I)的產(chǎn)生,進(jìn)一步增強(qiáng)放療誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫。放療還可以促進(jìn)細(xì)胞因子和趨化因子的釋放，從而增強(qiáng)DCs,自然殺傷細(xì)胞和CD8⁺T細(xì)胞在腫瘤部位的浸潤(rùn)。因此，放療與免疫治療的結(jié)合可以進(jìn)一步增強(qiáng)腫瘤部位的免疫反應(yīng)，有效改善放療的抗腫瘤效果。在腫瘤免疫治療中，免疫佐劑是消除腫瘤的有效方式，胞嘧啶-磷酸-鳥嘌呤寡脫氧核苷酸(cytosine-phosphorothioate-guanine oligodeoxynucleotides,CpG ODNs)被稱為最有效的免疫佐劑，已被開發(fā)用于治療癌癥。通過模式識(shí)別受體toll樣受體9(Toll-likereceptor 9,TLR9)的激活進(jìn)行免疫治療。CpG ODNs在病原體基因組中相對(duì)常見，通常充當(dāng)被TLR9識(shí)別的“危險(xiǎn)信號(hào)”，從而激活TLR9相關(guān)的信號(hào)通路。TLR9信號(hào)通路隨后增加促炎性細(xì)胞因子和趨化因子(如腫瘤壞死因子-α,tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素6(Interleukin-6,IL-6)的分泌，增強(qiáng)Th1免疫反應(yīng)。在人和小鼠膠質(zhì)瘤中，TLR9主要表達(dá)在腫瘤周圍浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞,漿細(xì)胞樣DCs,小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞)，但在腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)量非常低。因此，CpG ODNs在抗膠質(zhì)瘤中發(fā)揮作用主要依賴于腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞。值得注意的是，與其他TLR(TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR7)配體相比，CpG-ODNs(TLR9配體)在小鼠腦膠質(zhì)瘤的局部治療中能達(dá)到80％的治愈率，遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于其他TLR配體。然而，當(dāng)CpG ODNs用于新發(fā)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤或復(fù)發(fā)性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的局部治療時(shí)，患者的生存率并未得到明顯改善。一方面可能是惡性膠質(zhì)瘤在免疫逃逸過程中，分泌了大量免疫抑制因子并招募免疫抑制細(xì)胞，改造了腫瘤組織的微環(huán)境，從而逃避了免疫系統(tǒng)的識(shí)別和攻擊。另一方面，可能與惡性膠質(zhì)瘤中的免疫細(xì)胞攝取CpG ODNs后的低內(nèi)化有關(guān)。且CpGODNs在體內(nèi)不夠穩(wěn)定，容易被脫氧核糖核酸酶降解，這會(huì)大大降低其治療效果。因此，開發(fā)安全有效的藥物傳遞系統(tǒng)對(duì)提高CpG ODNs的作用尤其重要。