[發明專利]一種雷公藤專用促生菌劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202210628180.2
• 申請日: 2022-06-06
• 公開（公告）號: CN114891646A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 封磊;宋萍
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/36;A01P21/00;A01G7/06;C12R1/80
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 林文弘;蔡學俊

本發明屬于微生物菌劑技術領域，特別涉及一種雷公藤專用促生菌劑及其制備方法和應用。所述菌劑由歧皺青霉NS?12發酵而成，所述歧皺青霉NS?12的分類命名為歧皺青霉（Penicillium steckii），該菌株已于2011年6月10日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.4928。該菌劑對雷公藤有明顯的增益作用，可顯著提高雷公藤的生物量及甲素含量，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬于微生物菌劑技術領域，特別涉及一種雷公藤專用促生菌劑及其制備方法和應用。

背景技術

雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f．）是一種木質藤本植物，分布于我國南方福建、江西、浙江、湖北、湖南、廣東、臺灣等省，是珍貴的藥用植物。現代研究發現雷公藤含有100種以上的成分，主要分為生物堿類、二萜類、三萜類、倍半萜類及糖，而雷公藤甲素是其最主要的活性成分之一，具有抗炎、抗癌、免疫調整、抗生育等功效，廣泛用于治療類風濕性關節炎、肺病、腎病、皮膚病、白血病等疾病，是雷公藤片、雷公多甙片等多種成藥制劑的主要成分。長期以來雷公藤藥材主要依靠野生及人工種植獲取，由于有效成分含量極低，生長周期長，造成蘊藏量急劇下降，加之產地環境污染和為防病蟲噴施農藥等原因，使得原料藥的供應在數量和質量上都不能滿足臨床應用的需要。

近年來，隨著研究的不斷深入，一些生長在藥用植物體內的內生真菌引起了研究者的廣泛關注。迄今為止，國內外學者已從紅豆杉，銀杏，青蒿等藥用植物體內分離得到能夠產生與宿主相同或相似的藥用活性成分的內生真菌，從而為藥用活性物質的非植物源獲取提供了可能。但對這類特殊內生菌進行單獨發酵生產時發現，大多數菌株所產生的藥用活性成分含量極低，且受底物抑制效應明顯，并不能滿足大規模工業生產的條件。另有一些研究則發現，該類內生菌與宿主間的交互作用會對各自的活性成分生成產生影響，在一些內生菌與宿主植物所形成的菌植共生體中，其活性成分明顯高于宿主植物本身的含量，具有良好的應用前景。然而，由于這類內生菌均篩選自植物體內，對外界環境條件相對敏感，如何長期保藏并維持一定的菌體活性是影響其推廣應用的重要因素。本研究以一株前期篩選的具有生成雷公藤甲素能力的雷公藤內生真菌為對象，將其制備成微生物菌劑，并對該菌劑的菌體保存活性及實際施用效果進行了評價，相關成果對于促進雷公藤活性成分含量，提升其應用價值具有重意義。目前與此相關的研究則罕見報道。

發明內容

本發明為了彌補現有技術的不足，提供了一種雷公藤專用促生菌劑及其制備方法和應用。將該菌劑施用于雷公藤，可明顯促進雷公藤植株的生長，提高雷公藤甲素在雷公藤體內的含量，具有良好的應用前景。

本發明是通過如下技術方案實現的：

一種雷公藤專用促生菌劑，所述菌劑由歧皺青霉NS-12發酵而成，所述歧皺青霉NS-12的分類命名為歧皺青霉（Penicillium steckii），該菌株已于2011年6月10日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.4928。

進一步的，上述的雷公藤專用促生菌劑為固態菌劑。

進一步的，上述的雷公藤專用促生固態菌劑的制備方法包括如下步驟：

1）菌種活化：將低溫保存的歧皺青霉NS-12接種于PDA固體培養基上于28℃培養，待長出菌落后挑取單菌落轉接到新的PDA固體培養基上，在28℃繼續培養5d；

2）制備孢子懸浮液：將活化后的歧皺青霉NS-12接種到PDA平板上于28℃擴大培養，用無菌水洗脫孢子配制成濃度為1.0×10⁸個/mL的孢子懸浮液；

3）固體發酵：取100mL孢子懸浮液接種到1000g的固體發酵培養基中于28℃培養，每隔2~3天在無菌條件下進行一次攪拌，培養9 d后得到固體發酵菌劑；