[發明專利]由miRNA-211和H2 在審
| 申請號： | 202210620605.5 | 申請日： | 2022-06-01 |
| 公開（公告）號： | CN114958968A | 公開（公告）日： | 2022-08-30 |
| 發明（設計）人： | 陳文慧;鄺敬宇;沈薇;張景慧;唐盛;李婷婷;姚瑤 | 申請（專利權）人： | 江蘇科技大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6806 | 分類號： | C12Q1/6806;C12Q1/6886;C12N15/113;C12N15/11;G01N21/64 |
| 代理公司： | 南京經緯專利商標代理有限公司 32200 | 代理人： | 余俊杰 |
| 地址： | 212100 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | mirna 211 base sub | ||
1.由miRNA-211和H2S協同觸發的3D DNA network結構，其特征在于，所述3D DNAnetwork結構包括DNA-立方體框架、Ag NPs和由miRNA-211作為引發鏈形成的長雙鏈DNA軌道，其中，10nM DNA-立方體框架、7.8ppm Ag NPs和300nM長雙鏈DNA軌道的混合體積比為1:1:40；其中，Ag NPs嵌入DNA-立方體框架內，并與長雙鏈DNA軌道自組裝形成網絡結構。
2.權利要求1所述由miRNA-211和H2S協同觸發的3D DNA network結構的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1、制備Ag NP/ssDNA復合物
將NaBH4溶于冰的超純水中，磁力攪拌下向其中緩慢滴加AgNO3溶液，反應停止后離心、水洗，制得Ag NPs；取ssDNA與Ag NPs混合，振蕩、靜置交替進行，然后靜置時間持續4h孵育，孵育結束后逐次加入NaCl，使體系中NaCl最終濃度達到0.3M，室溫下老化12h。離心后使用0.1M PBS洗滌，形成Ag NP/ssDNA復合物；
S2、制備DNA-立方體框架
M13 mp18 DNA與訂書釘鏈混合，遵循一定的退火過程：95℃-70℃，每5℃為一個梯度，每梯度保持5min；70℃-50℃，每2℃為一個梯度，每梯度保持10min；50℃-20℃，每1℃為一個梯度，每梯度保持15min，形成DNA-立方體框架；
S3、制備長雙鏈DNA軌道
將兩種發夾DNA，分別為HP1、SEQ ID NO.1，HP2、SEQ ID NO.2，在95℃加熱5min，緩慢冷卻至室溫，取miRNA-211加入等量的HP1、HP2混合溶液中，37℃水浴下反應2h，觸發HCR反應形成長雙鏈DNA軌道；
S4、制備3D DNA network結構
將Ag NP/ssDNA復合物溶解于DNA-立方體框架中，再與S3中的HCR反應液等體積混合，在PCR儀中構筑3D DNA network結構；退火程序如下：25℃，10s；35℃，10s；40℃，1min；45℃，10min；40℃，1h；35℃，1h；30℃，1h；25℃，1h；20℃，1h；15℃，1h；10℃，1h；4℃，1h；
S5、分離3D DNA network結構
采用由DNA 1修飾的石英棒從反應體系中提取3D DNA network結構，將石英棒切割并浸沒于DNA 1溶液中，渦旋震蕩至少2h；然后轉移至DNA 2溶液中，37℃水浴條件下孵育1h，所得溶液在4℃保存。
3.根據權利要求2所述的由miRNA-211和H2S協同觸發的3D DNA network結構的制備方法，其特征在于，S1中NaBH4水溶液的濃度為4mM，NaBH4和AgNO3的摩爾比為1:1，500nM ssDNA與7.8ppm Ag NPs混合的體積比為2:1。
4.根據權利要求2所述的由miRNA-211和H2S協同觸發的3D DNA network結構的制備方法，其特征在于，S1中ssDNA濃度為500nM；PBS為0.1M，包括0.1M NaCl,10mM磷酸鹽。
5.根據權利要求2所述的由miRNA-211和H2S協同觸發的3D DNA network結構的制備方法，其特征在于，S1中滴加AgNO3溶液的反應時間為10min，離心條件為8000rpm離心5min；ssDNA與Ag NPs混合后振蕩5min、靜置25min、重復上述震蕩后靜置孵育。
6.根據權利要求2所述的由miRNA-211和H2S協同觸發的3D DNA network結構的制備方法，其特征在于，S2中M13 mp18 DNA與訂書釘鏈混合的摩爾比為1:10。
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