[發明專利]一種嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶及制備方法

在審

• 申請號: 202210618757.1
• 申請日: 2022-06-01
• 公開（公告）號: CN114807070A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 婁德帥;曹陽陽;李強;譚君;劉曦
• 申請（專利權）人: 重慶第二師范學院
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 重慶蘊博君晟知識產權代理事務所(普通合伙) 50223
• 代理人: 鄭勇

本發明涉及生物化學技術領域，具體涉及一種嗜熱型7α?羥基類固醇脫氫酶及制備方法，包括嗜熱型7α?羥基類固醇脫氫的酶蛋白序列如SEQ ID NO.1所示，本發明所述的首個嗜熱型7α?羥基類固醇脫氫酶的最適催化溫度為75℃，顯著高于目前已報道的嗜溫型酶，解決了現有的7α?羥基類固醇脫氫酶的熱穩定性差的問題。

技術領域

本發明涉及生物化學技術領域，尤其涉及一種嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶及制備方法。

背景技術

7α-、7β-羥基類固醇脫氫酶(Hydroxysteroid dehydrogenase，HSDH)可以偶聯催化游離態或結合態甾體類底物C7位羥基的差向異構，是生物轉化制備牛磺熊去氧膽酸(Tauroursodeoxycholic acid，TUDCA)的關鍵生物催化劑。

目前，現有技術公開的7α-羥基類固醇脫氫酶均為嗜溫酶，特征是對溫度敏感，熱穩定性差。因此，發現嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶迫在眉睫。

發明內容

本發明的目的在于提供一種嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶及制備方法，旨在解決現有的7α-羥基類固醇脫氫酶的熱穩定性差的問題。

為實現上述目的，第一方面，本發明提供了一種嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶，所述嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫的酶蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。

其中，所述7α-羥基類固醇脫氫酶的編碼基因如SEQ ID NO.2所示。

第二方面，本發明提供了一種表達盒，包含第一方面所述的嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶。

第三方面，本發明提供了一種表達載體，包含第一方面所述的嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶。

第四方面，本發明提供了一種重組細胞，包含第三方面所述的表達盒。

第五方面，本發明提供了一種嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶的制備方法，能夠成功誘導蛋白表達條件下培養第四方面所述的重組細胞并分離得到7α-羥基類固醇脫氫酶。

第六方面，本發明提供了一種催化劑，包含第一方面所述的嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶。

第七方面，本發明提供了一種實現化學物質生物轉化的方法，包含第一方面所述的嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶，或包含第七方面所述的催化劑與底物反應的酶促反應。

本發明的一種嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶及制備方法，通過嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫的酶蛋白序列如SEQ ID NO.1所示，本發明的首個嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶的最適催化溫度為75℃，顯著高于目前已報道的嗜溫型酶，解決了現有的7α-羥基類固醇脫氫酶的熱穩定性差的問題。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。

圖1是本發明提供的一種嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶的SDS-PAGE分析圖。

圖2是本發明提供的一種嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶的最適溫度測定結果圖。

圖3是本發明提供的一種嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶的制備方法的流程圖。

圖4是本發明提供的一種嗜熱型7α-羥基類固醇脫氫酶的應用的流程圖。

具體實施方式

下面詳細描述本發明的實施例，所述實施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附圖描述的實施例是示例性的，旨在用于解釋本發明，而不能理解為對本發明的限制。