[發明專利]用于檢測消化道感染性疾病病原體的引物組合

在審

• 申請號: 202210617047.7
• 申請日: 2022-06-02
• 公開（公告）號: CN114836581A
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 夏雪山;牛夢偉;馮悅;劉麗
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/6893;C12Q1/6851;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 昆明同聚專利代理有限公司 53214
• 代理人: 蘇蕓蕓

本發明公開了一種用于檢測消化道感染性疾病病原體的引物組合，其包括檢測EB病毒、巨細胞病毒、奇異變形桿菌、隱孢子蟲、傷寒沙門氏菌、卡他莫拉菌、小腸耶爾森氏菌、腺病毒的特異性引物和TaqMan探針；本發明方法可以同時檢測上述3種病毒、4種細菌和1種寄生蟲；且靈敏度高，特異性強，操作簡單、時間短、成本低廉，對消化道感染患者臨床早期診斷具有重要意義。

技術領域

本發明屬于病原體檢測技術領域，具體涉及一種同時檢測8種消化道感染性疾病病原體的引物和TaqMan探針。

背景技術

消化道疾病指的就是人體消化系統方面的疾病，主要是由于食用了被病原體污染了的水或食物，從而引起感染，病原體隨排泄物排出病人或攜帶者體外，經過生活接觸污染了手、水、食品和食具吃入體內而感染。該疾病不僅發病率高而且發病范圍廣泛，可以在所有年齡段的人群中出現，病情還很容易反復的發作，對于患者的身體健康也有很大的影響。消化道感染是一種常見疾病，最常引起感染性腹瀉，多因細菌、真菌、病毒、寄生蟲等感染導致。常見的消化道傳染病有細菌性痢疾、脊髓灰質炎（即小兒麻痹癥）、傷寒、副傷寒、霍亂、副霍亂、阿米巴痢疾、各種腸道病毒感染（如柯薩奇病毒、埃可病毒等），細菌性食物中毒以及各種腸道寄生蟲病（如蛔蟲病、絳蟲病、蟯蟲病、姜片蟲病）等。病原菌種類多，且病原菌與正常菌群共生，致病作用也各不相同。因此及時正確查找病因，制定合理的治療方案意義重大。

目前臨床檢測消化道病原體的方法有很多，如傳統的標本直接鏡檢法，病原體分離培養，免疫學檢查法等。目前分離培養法仍作為鑒定病原體的金標準，細菌性感染可通過普通培養基及選擇培養基，培養增殖細菌，便于檢驗鑒定。病毒性病原體可用猴腎、人胚腎、人羊膜細胞及 Hela 等各種傳代細胞進行培養，但是該方法耗時長，檢出率低，步驟繁瑣，條件要求高，需要經驗豐富的檢測人員，一般實驗室難完成。免疫學檢查是通過酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、固相放射免疫法、乳膠凝集試驗、化學發光免疫測定等方法，檢測糞便中的細菌、病毒、寄生蟲的抗原以及血清中的特異性抗體，但該方法存在一定的窗口期，需要一定的檢測時間，檢出率較低。近年來，隨著分子生物學的發展，環介導等溫擴增、基因芯片技術、數字PCR技術、NGS測序技術及實時熒光定量PCR技術等核酸檢測技術得到發展。這些技術都有靈敏度高、特異性強的優點可對病原體核酸進行檢測，但是如LAPM技術、基因芯片、數字PCR技術等均易產生假陽，基因芯片雖然通量高，但是價格昂貴、重復性差。

發明內容

針對現有技術的缺陷，本發明提供了一種用于檢測消化道感染性疾病病原體的引物組合，其包括檢測EB病毒、巨細胞病毒、奇異變形桿菌、隱孢子蟲、傷寒沙門氏菌、卡他莫拉菌、小腸耶爾森氏菌、腺病毒的特異性引物和TaqMan探針，該引物組合用于多重qPCR中，檢測中還涉及多重qPCR的常規檢測試劑，本發明對醫生或患者早期及時制定合理的醫療方案具有重要意義。

所述特異性引物為針對EB病毒的SEQ ID NO:1和 SEQ ID NO:2、針對巨細胞病毒的SEQ ID NO:4和 SEQ ID NO:5、針對奇異變形桿菌的SEQ ID NO:7和 SEQ ID NO:8、針對隱孢子蟲SEQ ID NO:10和 SEQ ID NO:11、針對傷寒沙門氏菌SEQ ID NO:13和 SEQ ID NO:14、針對卡他莫拉菌SEQ ID NO:16和 SEQ ID NO:17、針對小腸耶爾森氏菌SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20、針對腺病毒的SEQ ID NO:22和 SEQ ID NO:23；

所述TaqMan探針為針對EB病毒的SEQ ID NO:3、針對巨細胞病毒的SEQ ID NO:6、針對奇異變形桿菌的SEQ ID NO:9、針對隱孢子蟲SEQ ID NO:12、針對傷寒沙門氏菌SEQ IDNO:15、卡他莫拉菌SEQ ID NO:18、針對小腸耶爾森氏菌SEQ ID NO:21、針對腺病毒的SEQID NO:24。

TaqMan探針進行標記的熒光基團包括但不限于FAM、ROX、TAMRA、CY5；淬滅熒光基團的標記包括但不限于BHQ1、BHQ2、DABCYL。