[發明專利]用于檢測呼吸道感染性疾病病原體的多重qPCR檢測試劑

在審

• 申請號: 202210612569.8
• 申請日: 2022-06-01
• 公開（公告）號: CN114990261A
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 馮悅;劉文鋒;劉麗;夏雪山
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/6806;C12N15/11;C12R1/93;C12R1/46;C12R1/35;C12R1/01;C12R1/21
• 代理公司: 昆明同聚專利代理有限公司 53214
• 代理人: 蘇蕓蕓

本發明公開了一種用于檢測呼吸道感染性疾病病原體的多重qPCR檢測試劑，其包括檢測EB病毒、流感嗜血桿菌、肺炎支原體、肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、乙型流感病毒的特異性引物和探針；本發明利用實時熒光定量PCR技術對病原體靶基因進行檢測；該方法具有耗時短、特異性高、成本低，一次可檢測多種病原體的優點，為呼吸道感染性疾病病原體的檢測提供了便捷方法，對呼吸道感染患者臨床早期分子診斷具有重要意義。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種檢測9種呼吸道感染性疾病病原體的特異性引物和探針，本發明利用多重實時熒光定量PCR技術檢測呼吸道感染性疾病病原體。

背景技術

病原微生物入侵呼吸道進行繁殖而誘發疾病稱為呼吸道感染（RespiratoryTract Infection，RTI）。呼吸道感染可引起普通感冒、急性病毒性咽炎、喉炎、急性支氣管炎、急性毛細支氣管炎以及肺炎等臨床癥狀；同時，呼吸道感染是主要致死性疾病。世界范圍內，急性下呼吸道感染是導致5歲以下兒童死亡的首要原因，遠遠高于腹瀉和意外窒息等其他死因。病毒、細菌、真菌、支原體、衣原體等多種病原微生物可引起呼吸道感染。

臨床上多發的病毒有呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）、流感病毒（Influenza virus，IFV）、鼻病毒(Human rhinovirus，HRV)、巨細胞病毒(Humancytomegalovirus，HCMV)、EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）等。而細菌集中于肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae，SP）、流感嗜血桿菌（Haemophilus influenzae，HI）、卡他莫拉菌（Moraxella catarrhalis，MC）等。此外肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）等同樣可引起呼吸道感染。

早期及時準確的診斷有助于臨床正確合理用藥，幫助患者盡早恢復健康，減少病死率。細菌、病毒培養分離法作為臨床病原體檢測方法之一，其檢出率低、耗費時間長，無法滿足大量臨床樣本的檢測需求；NGS測序技術主要應用于非典型病原體的檢測，當前存在成本高、耗時長、容易污染等不足；基于抗原抗體反應原理的免疫學方法交叉反應易出現假陽性；基因芯片技術及數字PCR技術為新興分子生物學檢測方法，當面面臨費用較高且容易污染、生產標準化等問題；環介導等溫擴增技術引物設計要求較高，難以實現多種病原體高通量檢測；PCR結合Sanger測序技術雖然特異性高，但其檢測較為耗時，通量較低，往往不適合臨床即時診斷。

實時熒光定量PCR（Real-time fluoroscopy quantitative PCR，qPCR）技術首先被美國ABI（Applied Biosystems）公司推上市場，在此后的20多年迅速發展被廣泛應用。多重熒光定量PCR技術在呼吸道感染性疾病病原體檢方面具有特異性強、靈敏度高、操作簡單、時間短、成本低廉，適合人群大量樣本篩查等眾多優勢。

發明內容

本發明應用靶向病原體基因組保守區擴增和多重實時熒光定量PCR技術，提供了一種用于檢測呼吸道感染性疾病病原體的多重qPCR檢測試劑，其包括用于檢測9種呼吸道感染性疾病病原體的特異性引物和探針，還包括多重qPCR檢測其他常規檢測試劑，該方法以人呼吸道上皮細胞核糖核酸酶P（RNP）為內參，通過該方法，可實現對呼吸道樣本的高通量檢測，具有簡便、快速、準確和經濟等特點，為呼吸道病原體臨床早期診斷檢測提供了新途徑。