[發明專利]一種抗肉桂酰胺類殺菌劑的納米抗體及其應用

有效

• 申請號: 202210603341.2
• 申請日: 2022-05-30
• 公開（公告）號: CN114957478B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發明（設計）人: 沈玉棟;張詠儀;王弘;徐振林;楊金易;孫遠明
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C12N15/13;G01N33/53
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 趙崇楊

本發明公開了一種抗肉桂酰胺類殺菌劑納米抗體及其應用。本發明所述納米抗體可單獨或同時識別肉桂酰胺類殺菌劑，烯酰嗎啉和氟嗎啉，且具有良好的熱穩定性、有機溶劑耐受性及優異的耐酸性，可用于烯酰嗎啉和/或氟嗎啉的檢測或用于制備相應的檢測產品。此外，本發明還提供了一種檢測肉桂酰胺類殺菌劑的方法，對肉桂酰胺類殺菌劑烯酰嗎啉和氟嗎啉的檢測靈敏度(ICsubgt;50/subgt;)分別為2.63和5.18ng/mL，線性范圍分別為0.70～9.89ng/mL和0.95～28.22ng/mL，檢測靈敏度高，準確性好，且操作簡單耗時短，適于推廣使用。

技術領域

本發明屬于生物技術領域。更具體地，涉及一種抗肉桂酰胺類殺菌劑的納米抗體及其應用。

背景技術

烯酰嗎啉(Dimethomorph，DIM)和氟嗎啉(Flumorph，FLM)是兩種常用的肉桂酰胺類殺菌劑，其對霜霉屬、疫霉屬和腐霉屬等病原卵菌引發的果蔬真菌性病害具有良好的防治效果。烯酰嗎啉是最早研發成功的，氟嗎啉則是在烯酰嗎啉的基礎上利用氟原子取代氯原子而來。烯酰嗎啉和氟嗎啉雖對病原卵菌引發的病害具有良好的防治效果，但其本身具有中低毒性，使用后容易經過吸附、沉降等方式積累并殘留，進而對健康造成危害。有報道稱，烯酰嗎啉對雄性激素活性有抑制作用；氟嗎啉則具有肝臟毒性，會引發肝細胞脂肪變性等。因此，有必要對農作物中殘留的烯酰嗎啉和氟嗎啉進行靈敏、準確的檢測，避免其給人畜健康造成損傷。

現有用于檢測烯酰嗎啉的方法中，酶聯免疫吸附測定法(ELISA)由于具有靈敏度高、特異性強、儀器設備要求低以及樣本前處理相對簡單等優點而被廣泛應用。但酶聯免疫吸附測定法主要以單克隆抗體和多克隆抗體為主，此類抗體在極端條件下的穩定性差，容易失活。另在對樣品進行前處理的過程需要使用有機溶劑，而有機溶劑的殘留使得以單克隆抗體和多克隆抗體為主的免疫學檢測的靈敏度和準確度大大降低。因此，提供一種穩定性好，能耐有機溶劑的烯酰嗎啉抗體對烯酰嗎啉的準確檢測具有重要意義。而目前關于氟嗎啉檢測方法的報道較少，且多是利用QuEChERS法結合HPLC-MS/MS或QuEChERS法結合液相串聯質譜法進行檢測，對儀器設備的要求高。綜上，亟需提供一種檢測準確度高、靈敏度強、穩定性好的快速檢測肉桂酰胺類殺菌劑(即烯酰嗎啉和氟嗎啉)的產品和方法。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有上述技術的缺陷和不足，提供一種抗肉桂酰胺類殺菌劑的納米抗體及其應用。

本發明的第一個目的是提供一種抗肉桂酰胺類殺菌劑的納米抗體。

本發明的第二個目的是提供一種編碼所述納米抗體的基因。

本發明的第三個目的是提供一種重組載體。

本發明的第四個目的是提供一種重組細胞。

本發明的第五個目的是提供一種檢測肉桂酰胺類殺菌劑的方法。

本發明的第六個目的是提供所述納米抗體在檢測肉桂酰胺類殺菌劑中的應用。

本發明的第七個目的是提供所述納米抗體、所述基因、所述重組載體或所述重組細胞在制備檢測肉桂酰胺類殺菌劑的產品中的應用。

本發明的第八個目的是提供一種用于檢測肉桂酰胺類殺菌劑的試劑盒試劑盒。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

本發明提供了一種抗肉桂酰胺類殺菌劑的納米抗體，所述納米抗體是以本發明制備所得人工抗原免疫駱駝后從駱駝免疫抗體文庫中篩選得到，命名為納米抗體NbX-44E，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

具體地，本發明所述肉桂酰胺類殺菌劑為烯酰嗎啉和/或氟嗎啉。