[發明專利]一種兔圓小囊轉移因子的制備方法

在審

• 申請號: 202210594595.2
• 申請日: 2022-05-27
• 公開（公告）號: CN114949197A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 徐磊;王均輝;葉篤涵;王舒寧;楊慧;劉毅發;謝杼倢;王宗冬;鐘云欽;傅秋玲;廖惠珍;劉小龍;黃瑜;張淵魁
• 申請（專利權）人: 福建農業職業技術學院;派生特（福州）生物科技有限公司;福建興邦生物科技有限公司;福州眾為生物科技有限公司;福建福譽農業科技開發有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61P37/04
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

本發明公開了一種兔圓小囊轉移因子的制備方法，1）將注射用水與絞碎后的兔圓小囊混合，經膠體磨勻漿獲得勻漿液；2）勻漿液經細胞破碎后，離心，將收獲的上清液進行切向流過濾，收集透過物；3）將透過物用截留孔徑分子量不同的濾膜逐級進行切向流過濾，獲得所需的分子量范圍的兔圓小囊轉移因子粗制品；4）將步驟3）中至少一種分子量范圍的粗制品混合，即為兔圓小囊轉移因子初制品；5）對兔圓小囊轉移因子初制品除病毒后，調節PH和滲透壓，過濾除菌，獲得兔圓小囊轉移因子。本發明采用逐級切向流過濾，建立了精確有效的兔圓小囊轉移因子分離濃縮技術、小分子純化技術，選取截留孔徑分子量不同的濾膜按照不同的工藝技術流程可按需制備出各種不同分子量范圍的兔圓小囊轉移因子。

技術領域

本發明屬于生物制品領域，具體涉及一種兔圓小囊轉移因子的制備方法。

背景技術

轉移因子(Transfer factor,TF)是由具有免疫活性的T淋巴細胞釋放的一種細胞因子，由多肽和低聚核苷酸組成，分子量小于10千道爾頓(Kilodalton,kDa)，不含蛋白，無種屬特異性、無抗原性、無毒副作用，是一種新型免疫佐劑。TF具有廣泛的免疫調節活性，一方面具有非特異性，從無特定抗原刺激的供體可分離獲得非特異性TF(Nonspecific TF,NTF)，NTF可通過影響受體IFN-γ、IL-2、IL-4、TLR-2、TLR-4和cAMP的表達，進而增強同種或異種受體動物的非特異性免疫力；另一方面具有特異性，從受抗原刺激的供體可分離獲得特異性TF(Specific TF,STF)，STF可通過抗原特異性T淋巴細胞受體β鏈的一部分、肽序列和S100A9蛋白等致敏淋巴細胞的特異性免疫信息，介導激活受體的巨噬細胞和抑制性T淋巴細胞，進而將供體特異性細胞免疫功能轉移給同種或異種受體動物，激發特異性免疫，其反應強度與機體二次接觸同類病原所產生的免疫反應相當，如：抗乙型肝炎豬脾TF。TF對于目前抗體或者抗生素無法有效控制的傳染病及免疫缺陷疾病的預防起到重要作用。

TF是具有生物學活性的分子量范圍分布廣泛的非均一性小分子混合物，有學者認為TF是具有約44個氨基酸長度的蛋白質，通常具有約3kDa至約5kDa的分子量，但是TF分子可能具有該范圍外的分子量，并且還認為TF包括三個功能部分(誘導部分、免疫抑制部分和抗原特異性部分)，其中每個部分包括不同分子量的TF分子。也有許多學者認為TF還包括核苷部分，其可以連接蛋白分子或與其分開，該核苷部分可以提高TF誘導動物免疫系統二次免疫應答的能力，也可以是TF的誘導部分或抑制部分中的一部分。另有學者研究顯示TF主要包含至少581種不同分子量的多肽、核糖、Na、Zn、K、Mg、Ca等金屬元素和游離氨基酸等。

TF來源于動物脾臟、胎盤、圓小囊等組織器官，兔圓小囊是加工過程中的廢棄物，原料來源廣泛，有著極廣的應用開發前景。兔圓小囊被認為是法氏囊在哺乳動物的等同物，是兔重要的腸相關淋巴組織。有學者研究提出，無法氏囊的脊椎動物中，法氏囊的等同器官可能是腸相關淋巴組織。另有研究發現，腸相關淋巴組織的分化并不依賴腸內容物中可識別抗原的刺激，而是依賴某些必須的因子。因此，認為兔的腸相關淋巴組織是哺乳動物的中樞免疫器官，其控制體液免疫細胞系的發生與發展。兔圓小囊組織各區的細胞成分中，T細胞的數量及比例均較高，而上皮內淋巴細胞中漿細胞含量較多，通過組織化學、免疫組織化學以及超微結構觀察初步確定兔圓小囊淋巴組織中存在有彌散神經內分泌系統的細胞，此類細胞在受到抗原刺激后數量明顯增多。可見兔圓小囊為兔子特有的器官，集消化、免疫和神經內分泌為一體的重要器官。

目前，關于兔圓小囊轉移因子的制備方法存在以下不足：

(1)TF是具有生物學活性的分子量小于10kDa且分子量范圍分布廣泛的非均一性小分子混合物，包括三個功能部分(誘導部分、免疫抑制部分和抗原特異性部分)，其中每個部分包括不同分子量的TF分子。不同分子量的TF具有不同的生物學活性，因此，TF的組份分子量不同，其生物學活性、制備質量、使用劑量、臨床應用均有不同。現有TF制造技術缺乏有效的TF分離濃縮技術、小分子純化技術，不具備不同分子量TF的制備方法，導致無法獲得不同分子量組成的TF。這些限制了TF的生物學活性研究、作用機理研究及有效臨床應用。