[發(fā)明專利]一種殼多糖酶3樣蛋白1試劑盒

在審

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• 申請日: 2022-05-27
• 公開（公告）號: CN114859048A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發(fā)明（設計）人: 鄒繼華;劉獻文;方亮;侯文婷;賈江花;鄒炳德
• 申請（專利權(quán)）人: 美康生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/543;G01N33/531;C07K16/40;G01N21/47;G01N21/59
• 代理公司: 浙江中桓凱通專利代理有限公司 33376
• 代理人: 劉瀟

本發(fā)明提供一種殼多糖酶3樣蛋白1試劑盒，包括：第一試劑，包括：緩沖液、表面活性劑、鹽、防腐劑、抗干擾物質(zhì)；第二試劑，包括：納米微球標記的CHI3L1多克隆抗體或納米微球標記的兩株具有CHI3L1不同結(jié)合位點的單克隆抗體混合物。本發(fā)明解決了現(xiàn)有CHI3L1檢測方法操作復雜的技術問題，實現(xiàn)了操作簡便的技術效果。

技術領域

本發(fā)明涉及體外診斷技術領域，具體而言，涉及一種殼多糖酶3樣蛋白1試劑盒。

背景技術

殼多糖酶3樣蛋白1(Chitinase-3-like protein 1)(CHI3L1)是糖基水解酶家族18中的一員，糖基水解酶家族18包括幾丁質(zhì)酶和幾丁質(zhì)酶相關蛋白(CLPs)。CHI3L1是一種凝集素，結(jié)合幾丁質(zhì)和肝素，但它沒有幾丁質(zhì)酶活性。因為其分子量(40kDa)和其三個n端氨基酸的一個字母編碼而被命名為YKL-40，也被稱為人軟骨糖蛋白-39。

CHI3L1功能性研究表明其可參與炎癥紊亂、細胞遷移、組織重塑、腫瘤發(fā)生和纖維化過程。研究發(fā)現(xiàn)，高水平的CHI3L1可增加患者發(fā)生肝纖維化的風險，可能與CHI3L1引起細胞因子改變、導致炎癥紊亂及激活固有免疫應答，進而促進纖維化發(fā)展。另外，CHI3L1可由HSC分泌，其血清濃度與由HSC和成纖維細胞所分泌的細胞外基質(zhì)相關，因此，CHI3L1血清濃度在一定程度上可以反映肝纖維化的程度。國內(nèi)外多項研究發(fā)現(xiàn)在酒精性肝病及非酒精性脂肪肝患者中血清CHI3L1水平較正常對照組升高，并與肝纖維化程度呈正相關，肝硬化患者中水平最高。Saitou等發(fā)現(xiàn)CHI3L1診斷明顯肝纖維化、嚴重肝纖維化及早期肝硬化的受試者工作特征曲線下面積可分別達0.792、0.914、0.936，提示CHI3L1是一個潛在的診斷性能較好的血清學標記物。

目前CHI3L1檢測方法有ELISA法、化學發(fā)光免疫分析法等，以上檢測方法均采用雙抗體夾心法原理，其中第一抗體(固定抗體、包被抗體)固定在酶標板、磁微粒等固相載體上，第二抗體(檢測抗體、標記抗體)用于標記酶、發(fā)光物質(zhì)等，其操作方法是樣本先行與第一抗體結(jié)合，然后清洗去除多余的樣本，再加入第二抗體形成三明治復合物，然后進行酶催化或發(fā)光反應。

存在的問題是：上述CHI3L1檢測方法試劑成分多(3種或以上)，操作復雜。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決了現(xiàn)有CHI3L1檢測方法操作復雜的技術問題，實現(xiàn)了檢測過程操作簡便的技術效果。

為解決上述問題，本發(fā)明提供一種殼多糖酶3樣蛋白1試劑盒，包括：第一試劑，包括：緩沖液、表面活性劑、鹽、防腐劑、抗干擾物質(zhì)；第二試劑，包括：納米微球標記的CHI3L1多克隆抗體或納米微球標記的兩株具有CHI3L1不同結(jié)合位點的單克隆抗體混合物。

與現(xiàn)有技術相比，采用該技術方案所達到的技術效果：本發(fā)明提供的CHI3L1試劑盒，將兩株具有CHI3L1不同結(jié)合位點的單克隆抗體混合成混合抗體，或采用多克隆抗體作為一種試劑，解決了兩種抗體分別單獨作為一種試劑組分的問題，減少了試劑成分，進而配置更加簡單，操作更簡便。并且，采用均相分析法，節(jié)省了清洗步驟，不需要中間清洗步驟，操作人員在操作時只需將待檢測品與第一試劑和第二試劑進行混合后檢測即可，操作更加簡便快捷。

分析方法如下：將待檢測品加入第一試劑中，待檢測品被第一試劑稀釋，然后加入第二試劑，第二試劑中納米微球標記的CHI3L1抗體與待檢測品中的CHI3L1特異性結(jié)合形成抗原抗體復合物，進一步地，納米微球聚合成復合物。復合物的大小及數(shù)量影響光的散射，復合物的量與待檢測品中的CHI3L1濃度水平呈正相關關系，通過檢測復合物對光的散射或透光率可對待檢測品中的CHI3L1進行定量分析，操作簡單快捷。

在本發(fā)明的一個實例中，試劑盒還包括校準物質(zhì)，校準物質(zhì)包括濃度范圍在0-1000ng/mL的重組人CHI3L1蛋白溶液或干粉。