[發明專利]膽固醇-25-羥化酶及其酶促產物在制備抗家蠶核型多角體病毒藥物中的用途

在審

• 申請號: 202210581676.9
• 申請日: 2022-05-26
• 公開（公告）號: CN115006519A
• 公開（公告）日: 2022-09-06
• 發明（設計）人: 孫京臣;吳鴻韻;馮敏;夏君銘;費世港
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: A61K38/44
• 分類號: A61K38/44;A61P31/20;C12N9/02;C12N15/53;C12P33/00;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務所 44329
• 代理人: 熊冰

本發明屬于農業生物領域，涉及家蠶膽固醇?25?羥化酶及其酶促產物在制備抗家蠶核型多角體病毒藥物中的用途。本發明用家蠶核型多角體病毒(BmNPV)感染細胞和家蠶幼蟲引起膽固醇?25?羥化酶(BmCH25H)的表達上調，而上調的BmCH25H又能夠抑制BmNPV的復制，同時發現BmCH25H的酶促產物25?羥基膽固醇(25HC)對BmNPV的感染也具有抑制作用。本發明首次通過體外和體內實驗證明過表達BmCH25H和25HC都能夠抑制BmNPV的感染。

技術領域

本發明屬于農業生物領域，具體涉及膽固醇-25-羥化酶及其酶促產物在制備抗家蠶核型多角體病毒藥物中的用途。

背景技術

膽固醇-25-羥化酶(cholesterol-25-hydroxylase，CH25H)是一種大小為31.6kDa的多跨膜內質網(endoplasmic reticulum，ER)相關酶，其主要功能是催化膽固醇產生25-羥基膽固醇(25-hydroxycholesterol，25HC)，減少體內膽固醇積累。研究發現CH25H在哺乳動物中是一種保守的干擾素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)，具有廣譜的抗病毒功能。CH25H主要是通過其羥化酶活性將膽固醇轉化為25HC來發揮抗病毒作用，25HC是一種內源性羥基甾醇，通過抑制甾醇調節結合蛋白(SREBP)和激活肝X受體(LXR)來維持膽固醇穩態。此外，25HC還被證明可以抑制多種病毒的復制，例如丙型肝炎病毒(HCV)、鼠皰疹病毒68(MHV68)、人類免疫缺陷病毒(HIV)、寨卡病毒(ZIKV)和水皰性口炎病毒(VSV)。

家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)，桿狀病毒科，核型多角體病毒屬，病毒粒子呈現桿狀形態，是目前研究比較清楚的桿狀病毒研究模式種之一。家蠶作為一種經濟效益高的鱗翅目昆蟲，是我國農業經濟的重要組成成分。家蠶是BmNPV病毒的易感昆蟲，BmNPV是家蠶養殖生產中危害最嚴重的一種病毒。家蠶感染BmNPV后，會表現出狂躁不安，在蠶座上爬行表現出“趨上性”，體色乳白等臨床表現，導致血液型膿病的發生，致使家蠶的死亡，嚴重影響蠶繭產量和質量，對蠶桑產業造成巨大經濟損失。

因此，研究膽固醇-25-羥化酶(CH25H)及其酶促產物25-羥基膽固醇(25HC)對家蠶核型多角體病毒的抗病毒作用，并利用其制備抗家蠶核型多角體病毒的藥物具有重要意義。

發明內容

針對上述問題，本發明的目的一在于提供膽固醇-25-羥化酶(CH25H)或其酶促產物25-羥基膽固醇(25HC)在制備抗家蠶核型多角體病毒藥物中的應用，目的二在于提供一種家蠶核型多角體病毒抑制劑，目的三在于提供抑制家蠶體外細胞中BmNPV感染的方法。本發明通過試驗證實膽固醇-25-羥化酶(CH25H)及其酶促產物25-羥基膽固醇(25HC)對BmNPV具有良好的抑制效果。

本發明采用的具體方案為：

第一方面，本發明提供以下任意一種在制備抗家蠶核型多角體病毒藥物中的應用：a)、膽固醇-25-羥化酶；

b)、編碼膽固醇-25-羥化酶的基因；

c)、包含b)的重組質粒；

d)、包含b)的重組菌；

e)、膽固醇-25-羥化酶的酶促產物25-羥基膽固醇。

第二方面，本發明提供一種家蠶核型多角體病毒抑制劑，包括膽固醇-25-羥化酶或/和25-羥基膽固醇。優選地，所述抑制劑還包括藥學上可接受的輔料或載體。

第三方面，本發明提供一種抑制家蠶體外細胞中家蠶核型多角體病毒感染的方法，采用如下(a)或/和(b)所示的方法：

(a)、首先擴增得到編碼BmCH25H的基因，將其克隆到pIEX1質粒中，構建帶有標簽序列的過表達質粒pIEX1-BmCH25H-V5；將所述過表達質粒pIEX1-BmCH25H-V5轉染BmN細胞，在BmN細胞中誘導表達BmCH25H；