[發明專利]一種血液樣本分離和凍存的方法

在審

• 申請號: 202210577606.6
• 申請日: 2022-05-25
• 公開（公告）號: CN114964966A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 劉中民;趙慶輝;湯紅明;許嘯;黎李平
• 申請（專利權）人: 上海市東方醫院（同濟大學附屬東方醫院）
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/40;G01N1/42;A01N1/02
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

本發明屬于血液樣本處理技術領域，具體涉及一種血液樣本分離和凍存的方法。本發明對待分離血液分別進行抗凝處理和促凝處理，得抗凝血和促凝血；分別對抗凝血和促凝血進行處理，得到全血、血漿、白膜層液體、少漿血、血清和血凝塊，包括了全血樣本，細胞樣本和核酸樣本，豐富了樣本種類，保證了樣本類型的完整。本發明采用不同的凍存方法對多種樣本進行凍存，能夠保證細胞樣本復蘇后的活率以及核酸樣本的濃度和純度，樣本質量可靠。

技術領域

本發明屬于血液樣本處理技術領域，具體涉及一種血液樣本分離和凍存的方法。

背景技術

血液是流動在動物血管和心臟中的一種紅色不透明的黏稠液體。血液由血漿和血細胞組成，一升血漿中含有900-910克的水，65-85克的蛋白質和20克的低分子物質，低分子物質中有多種電解質和有機化合物，血細胞包括紅細胞和白細胞和血小板三類細胞。紅細胞平均壽命為120天，白細胞壽命為9-13天，血小板壽命為8-9天。血液的功能包含血細胞功能和血漿功能兩部分，有運輸、調節人體溫度、防御、調節人體滲透壓和酸堿平衡四個功能。

隨著生物技術的發展，對血液樣本分離和冷凍保存，在有需要時進行解凍回輸已經成為一種治療疾病的重要手段。血液樣品的分離和冷凍也已經成為一項成熟的技術。但是目前臨床研究中，血液樣品分離較為單一，通常以分離血清和血漿為主，無法滿足實際治療需要。如何建立高質量的血液樣品分離方法仍屬于本行業亟待解決的技術問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種血液樣本分離和凍存的方法，分離獲得多種血液樣本，保證樣本的質量。

本發明提供了一種血液分離方法，包括如下步驟：

將待分離血液分別進行抗凝處理和促凝處理，得抗凝血和促凝血；

對部分抗凝血進行第一離心，得血漿、白膜層液體和少漿血；

將部分抗凝血與PBS和淋巴細胞分離液混合，第二離心獲得單個核細胞；

對所述促凝血進行第三離心，得血清和血凝塊。

優選的，所述第一離心的溫度為4℃，轉速為1200g，時間為10min。

優選的，提取所述單個核細胞時，所述抗凝血與PBS和淋巴細胞分離液的體積比為3:2:1。

優選的，所述第二離心包括升速1～2g，降速0～2g，600g離心20min后，抽取混合液中的白膜層，升速4～6g，降速1～3g，600g離心10min。

優選的，所述第三離心的轉速為1600g，時間為10min。

本發明提供了一種血液樣本凍存方法，包括如下步驟：

將上述技術方案所述分離方法得到的單個核細胞與凍存液混合，4℃保溫10min后進行變溫處理；

所述變溫處理依次包括：以1℃/min的速率降溫至-9℃，以50℃/min的速率降溫至-50℃，以25℃/min的速率升溫至-25℃，以1℃/min的速率降溫至-50℃，以10℃/min的速率降溫至-90℃；

將上述技術方案所述血液分離方法得到的血漿、白膜層液體、少漿血、血清層和凝血塊層分別放入液氮中浸泡20～30s，-80℃凍存；

將剩余部分的抗凝血放入液氮中浸泡20～30s，-80℃凍存。

優選的，按照體積百分含量計，所述凍存液包括10％二甲基亞砜、70％基礎培養基和20％血清。

優選的，按照體積百分含量計，所述凍存液包括70％基礎培養基、20％血清、余量的二甲基亞砜和乙二醇。

優選的，所述二甲基亞砜和乙二醇的體積比為5～7：3～5。