[發明專利]一株高產肌苷緩解潰瘍性結腸炎的假長雙歧桿菌及其應用

有效

• 申請號: 202210575782.6
• 申請日: 2022-05-24
• 公開（公告）號: CN114854639B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 毛丙永;郭偉靈;崔樹茂;唐鑫;張秋香;趙建新;張灝;陳衛
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/40;A23L33/135;A23C9/152;A23C9/18;A61K35/745;A61P29/00;A61P1/04;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 趙巧娜

本發明公開了一株高產肌苷緩解潰瘍性結腸炎的假長雙歧桿菌及其應用，屬于功能性微生物技術領域。本發明提供了的假長雙歧桿菌CCFM1253保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號為GDMCC?No：62274，保藏日期為2022年3月6日。本發明的假長雙歧桿菌CCFM1253的肌苷產量可高達3.4mg/mL；本發明的假長雙歧桿菌CCFM1253可以顯著緩解結腸炎引起的體重損失，顯著降低結腸中IL?1β，IL?6和TNF?α水平和升高IL?10水平，抑制髓過氧化物酶活性，提高其抗氧化酶活力，促進與結腸緊密連接相關蛋白(ZO?1，Claudin?1和Occludin)的表達，可見，本發明的菌株在制備預防和/或治療結腸炎的產品中具有巨大的應用前景。

技術領域

本發明涉及一株高產肌苷緩解潰瘍性結腸炎的假長雙歧桿菌及其應用，屬于功能性微生物技術領域。

背景技術

潰瘍性結腸炎(UC)是一種慢性炎癥反應，其發病率逐年的增加。調查發現，潰瘍性結腸炎是影響兒童和青少年的最常見的胃腸道慢性疾病之一，17歲之前診斷的病例超過20％。近幾年來，越來越多的研究者對潰瘍性結腸炎的發病機理及治療方法進行了深入的探索。潰瘍性結腸炎的臨床癥狀典型癥狀包括大便出血、腹瀉、急迫、尿失禁、疲勞、排便頻率增加、粘液排出、夜間排便和腹部不適。

目前的潰瘍性結腸炎治療主要通過抗炎和免疫抑制機制控制炎癥。治療潰瘍性結腸炎常用的藥物包括艾迪莎、美沙拉嗪、柳氮磺胺吡啶、氫化可的松、氫化波尼松和硫唑嘌呤等，它們通過調節相關炎癥通途和提高抗氧化酶的活力等來改善潰瘍性結腸炎。然而，長期服用這些藥物可能產生多種嚴重的副作用，如高血壓、糖尿病、關節炎和腎損傷等，更有甚者嚴重和潛在威脅生命的感染和腫瘤的風險。為了降低其并發癥及其長期服用藥物帶來一些的副作用，迫切尋求一種更加有效且副作用小的干預方式。近幾年來，許多研究者發現一些特異的益生菌對潰瘍性結腸炎具有緩解作用。相對藥物來說，益生菌對潰瘍性結腸炎的干預具有較小的副作用。因此，篩選出具有抑制促炎因子、修護腸道屏障和提高抗氧化酶活力的益生菌對潰瘍性結腸炎進行輔助治療。

發明內容

本發明的第一個目的是提供了一株假長雙歧桿菌(Bifidobacteriumpseudolongum)CCFM1253，所述假長雙歧桿菌CCFM1253保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號為GDMCC?No：62274，保藏日期為2022年3月6日。

所述假長雙歧桿菌(Bifidobacterium?pseudolongum)CCFM1253來源于正常人糞便樣本，該菌株經測序分析，其16S?rDNA序列如SEQ?ID?NO.1所示，提取篩選得到的菌株的基因組進行16S?rDNA擴增，獲得PCR產物進行測序(上海華大基因科技有限公司)。將獲得的序列在NCBI-Blast中進行核酸序列比對，結果顯示，該菌株為假長雙歧桿菌，命名為假長雙歧桿菌(Bifidobacterium?pseudolongum)CCFM1253。

所述假長雙歧桿菌(Bifidobacterium?pseudolongum)CCFM1253在MRS固體培養基上的菌落突起，呈光滑、圓形、乳白色、半透明狀，直徑為1～2mm。

本發明的第二個目的是提供一種微生物菌劑，所述微生物菌劑中，含有上述假長雙歧桿菌CCFM1253，或含有假長雙歧桿菌CCFM1253的發酵液，或含有假長雙歧桿菌CCFM1253的凍干粉，或含有假長雙歧桿菌CCFM1253滅活的菌體、或含有假長雙歧桿菌CCFM1253的裂解物，或含有所述假長雙歧桿菌CCFM1253提取物。

在本發明的一種實施方式中，所述微生物菌劑的制備方法為：

假長雙歧桿菌CCFM1253接種到MRS培養基中，然后在36～38℃厭氧條件下培養20～30小時。培養液離心(8000～12000rpm/min，5～20min，0～8℃)，用生理鹽水清洗3～5次，添加凍干保護劑，菌液最后的濃度高于1×10⁶CFU/mL，將其重懸液進行真空冷凍干燥，獲得菌粉。