[發(fā)明專利]一株高效表達(dá)腺苷脫氨酶緩解結(jié)腸炎副干酪乳桿菌

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210575758.2
• 申請日: 2022-05-24
• 公開（公告）號: CN114854638A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐鑫;郭偉靈;毛丙永;崔樹茂;張秋香;趙建新;張灝;陳衛(wèi)
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/78;A61K35/744;A61P1/00;A61P1/04;A61P29/00;A23L33/135;A23L19/00;A23L29/00;A23L11/50;A23C9/123;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 趙巧娜

本發(fā)明公開了一株高效表達(dá)腺苷脫氨酶緩解結(jié)腸炎副干酪乳桿菌，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一株副干酪乳桿菌(Lacticaseibacillus paracasei)CCFM1223，于2022年3月6日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號為GDMCC No：62271。本發(fā)明提供的副干酪乳桿菌CCFM1223改善結(jié)腸炎小鼠糞便松軟、便血和體重；抑制結(jié)腸組織中促炎因子水平的升高；增加結(jié)腸組織中抗氧化酶活性；抑制結(jié)腸組織中丙二醛的含量；抑制結(jié)腸組織中髓過氧化物酶活力；上調(diào)結(jié)腸組織中緊密連接蛋白基因的轉(zhuǎn)錄水平，可見，本發(fā)明的副干酪乳桿菌CCFM1223制備預(yù)防和/或治療結(jié)腸炎的產(chǎn)品中具有巨大的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株高效表達(dá)腺苷脫氨酶緩解結(jié)腸炎副干酪乳桿菌，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

炎癥性腸病的特征是胃腸道的非感染性慢性炎癥，主要包括克羅恩病(可影響胃腸道從口腔到肛門的任何部分)、潰瘍性結(jié)腸炎(僅限于結(jié)腸粘膜)和不確定的結(jié)腸炎，其中潰爛性結(jié)腸炎較為普遍。20世紀(jì)50年代以來，潰爛性結(jié)腸炎的發(fā)病率不斷升高且發(fā)病年齡不斷降低嚴(yán)重影響著患者及家人的生活質(zhì)量。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，潰爛性結(jié)腸炎的最高發(fā)病率大約為萬分之三，而患病率高達(dá)千分之五，給社會醫(yī)療成本造成極大的負(fù)擔(dān)。近幾年來，我國潰爛性結(jié)腸炎患者增長速率增加，呈現(xiàn)出男多女少的趨勢。目前潰爛性結(jié)腸炎尚無完全治愈的治療方案，因此需深入研究潰爛性結(jié)腸炎病理過程與發(fā)病機(jī)制有望為開發(fā)新的干預(yù)方法提供幫助。

目前的潰瘍性結(jié)腸炎治療主要通過抗炎和免疫調(diào)節(jié)劑，以使疾病進(jìn)入緩解期。治療潰瘍性結(jié)腸炎常用的藥物包括5-氨基水楊酸、美沙拉嗪、柳氮磺胺吡啶、氫化可的松、氫化波尼松和硫唑嘌呤等。這些藥物通過調(diào)節(jié)相關(guān)炎癥通途和提高抗氧化酶的活力等方式有效的緩解潰爛性結(jié)腸炎。然而，長期服用會產(chǎn)生多種嚴(yán)重的副作用，如腹瀉、頭痛、發(fā)熱和易疲勞等，更有甚者嚴(yán)重和潛在威脅生命的感染和腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)。因此，有必要發(fā)展防治潰爛性結(jié)腸炎的新方法。近幾年來，許多研究者發(fā)現(xiàn)一些特異的益生菌對潰瘍性結(jié)腸炎具有緩解作用。相對藥物來說，益生菌對潰瘍性結(jié)腸炎的干預(yù)具有較小的副作用。因此，篩選出具有抑制促炎因子、修護(hù)腸道屏障和提高抗氧化酶活力的益生菌對潰瘍性結(jié)腸炎進(jìn)行輔助治療。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供了一株副干酪乳桿菌(Lacticaseibacillusparacasei)

CCFM1223，于2022年3月6日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號為GDMCCNo：62271。

所述副干酪乳桿菌(Lacticaseibacillus paracasei)CCFM1223來源于新生健康嬰兒糞便，提取菌株的全基因組DNA用于16S rDNA的擴(kuò)增，收集擴(kuò)增后的DNA片段用和測序(由蘇州安升達(dá)科技有限公司，其16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，經(jīng)測序分析，結(jié)果顯示，該菌株為副干酪乳桿菌，命名為副干酪乳桿菌(Lacticaseibacillus paracasei)CCFM1223。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種上述副干酪乳桿菌CCFM1223在制備含有腺苷脫氨酶的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述含有腺苷脫氨酶產(chǎn)品的制備方法為：

(1)將副干酪乳桿菌CCFM1223種子液接入MRS液體培養(yǎng)基中，置于37培養(yǎng)箱下培養(yǎng)18h，制備得到發(fā)酵液；

(2)將制備得到的發(fā)酵液在6000rpm，4℃條件下離心3min，獲得副干酪乳桿菌CCFM1223菌體細(xì)胞，將制備得到的菌體細(xì)胞添加至含有10mg/mL腺苷的5mL PBS溶液中，在37℃條件下發(fā)酵12小時(shí)，獲得含有腺苷脫氨酶的液體。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供了一種微生物菌劑，所述微生物菌劑中含有副干酪乳桿菌CCFM1223活細(xì)胞，或含有副干酪乳桿菌CCFM1223發(fā)酵液，或含有副干酪乳桿菌CCFM1223凍干粉，或含有副干酪乳桿菌CCFM1223滅活的菌體細(xì)胞。