[發(fā)明專利]鑒別大黃魚和小黃魚的雜交魚線粒體母系遺傳的引物組及其應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210573082.3 | 申請日： | 2022-05-25 |
| 公開（公告）號： | CN115011705A | 公開（公告）日： | 2022-09-06 |
| 發(fā)明（設計）人： | 郭丹丹;樓寶;劉峰;牛寶龍 | 申請（專利權）人： | 浙江省農(nóng)業(yè)科學院 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213 | 代理人： | 沈淵琪 |
| 地址： | 310021 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 鑒別 大黃魚 小黃魚 雜交 線粒體 母系 遺傳 引物 及其 應用 | ||
1.鑒別大黃魚和小黃魚的雜交魚線粒體母系遺傳的引物組，所述雜交魚為大黃魚♀×小黃魚♂的雜交魚，其特征在于該引物組包括基于cox1基因的特異性引物及其RT-PCR引物和基于tfam核基因的特異性引物及其RT-PCR引物；
所述基于cox1基因的特異性引物包括cox1-LC-R、cox1-LP-R、cox1-LC﹠LP-F和cox1-LC﹠LP-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ NO.4所示；
所述基于cox1基因的RT-PCR引物包括cox1-LC-RT-F、cox1-LC-RT-R、cox1-LP-RT-F、cox1-LP-RT-R、cox1-LC﹠LP-RT-F和cox1-LC﹠LP-RT-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5～SEQID NO.10所示；
所述基于tfam核基因的特異性引物包括tfam-LC-R、tfam-LP-R、tfam-LC﹠LP-F和tfam-LC﹠LP-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.11～SEQ ID NO.14所示；
所述基于tfam核基因的RT-PCR引物包括tfam-LC-RT-F、tfam-LC-RT-R、tfam-LP-RT-F、tfam-LP-RT-R、tfam-LC﹠LP-RT-F和tfam-LC﹠LP-RT-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.15～SEQID NO.20所示。
2.如權利要求1所述的引物組在鑒別大黃魚和小黃魚的雜交魚線粒體母系遺傳中的應用。
3.如權利要求1或2所述的的應用，其特征在于所述大黃魚和小黃魚的雜交魚為大黃魚♀×小黃魚♂的雜交魚。
4.利用權利要求1所述的引物組鑒別大黃魚和小黃魚的雜交魚線粒體母系遺傳的方法，其特征在于包括以下步驟：
1)以大黃魚♀×小黃魚♂的雜交魚、小黃魚及大黃魚基因組DNA為模板，分別用引物對cox1-LC﹠LP-F/cox1-LC-R、cox1-LC﹠LP-F/cox1-LP-R、cox1-LC﹠LP-F/cox1-LC﹠LP-R和tfam-LC﹠LP-F/tfam-LC-R、tfam-LC﹠LP-F/tfam-LP-R、tfam-LC﹠LP-F/tfam-LC﹠LP-R進行基因組DNA PCR擴增，獲得3種魚cox1和tfam基因特異序列；
2)以大黃魚♀×小黃魚♂的雜交魚、小黃魚及大黃魚cDNA單鏈為模板，分別用引物對cox1-LC-RT-F/cox1-LC-RT-R、cox1-LP-RT-F/cox1-LP-RT-R、cox1-LC﹠LP-RT-F/cox1-LC﹠LP-RT-R和tfam-LC-RT-F/tfam-LC-RT-R、tfam-LP-RT-F/tfam-LP-RT-R、tfam-LC﹠LP-RT-F/tfam-LC﹠LP-RT-R進行RT-PCR擴增，獲得3種魚cox1和tfam基因cDNA特異序列；
3)PCR擴增反應結(jié)束后，用1.2％的瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物，隨后用凝膠成像系統(tǒng)拍照記錄電泳結(jié)果。
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