[發明專利]一種精原干細胞移植受體的制備方法

在審

• 申請號: 202210568054.2
• 申請日: 2022-05-24
• 公開（公告）號: CN114948919A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 岳耀敬;李建燁;吳怡;盧曾奎;郭婷婷;袁超;牛春娥;文亞洲;楊博輝;張瑞
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所
• 主分類號: A61K31/14
• 分類號: A61K31/14;A61K9/08;A01K67/02;A61P15/00
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 毛婷

本發明屬于應用型生物技術領域，具體涉及一種精原干細胞移植受體制備的方法，本發明通過睪丸注射苯扎氯銨的方法制備了精原干細胞移植受體；所述方法不僅能夠快速制備精原干細胞移植受體，且不會對試驗動物產生嚴重的機體損傷，屬于一種新型精原干細胞移植受體制備方法；所述方法簡單易操作、高效低毒，是一種成本低廉，操作簡便、高效、快速、安全、可行的精原干細胞移植受體制備方法，具有廣泛的應用價值。

技術領域

本發明屬于應用型生物技術領域，具體涉及一種精原干細胞移植受體制備的方法。

背景技術

雄性精子發生過程受睪丸支持細胞和其它類型睪丸體細胞的共同調節。SSC移植是將供體SSC注射到受體睪丸網中，重新遷移并定植在精原干細胞“龕”中，建立起穩定的供體來源的精子發生過程。精原干細胞是生精上皮近基底膜的一群具有高度自我更新和多向分化潛能的二倍體細胞，是成年動物體內唯一能將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細胞。精原干細胞既能持續自我更新保持自身群體數量恒定，又能不斷分化產生各級精原細胞，并最終生成精子。精原干細胞移植是實現干細胞育種的第一步，其主要障礙是缺乏成熟且高效的受體制備方法。為了保證供體精原干細胞移植到受體睪丸網中不會被內源性種系所消融，要求受體模型保留正常體細胞功能和曲細精管結構。自1994年，Brinster團隊首次將SSC細胞懸液移植到生育缺陷小鼠睪丸的曲細精管中，并觀察到完整的精子發生過程，經自然交配后產生了正常后代，為男性生殖醫學和研究人類生精理論提供了可能。

受體制備是精原干細胞移植技術的重要組成部分，是成功移植的必要條件和前提基礎，受體制備的效率直接關系到移植效果。目前，已經建立了腹腔注射白消安、睪丸注射白消安等受體制備技術，通過這些技術處理，使受體睪丸的各級生精細胞發生凋亡，在曲精細管支持細胞包圍的近腔小室和基底小室中形成空腔，便于移植后供體精原干細胞的內遷和附植，進而完成再生分化和精子發生。雖然已經建立了較為成熟的受體制備方法，但由于白消安自身的毒性，會對試驗動物產生嚴重的機體損傷，而且隨著血液循環的不斷更新，白消安逐漸被代謝，最終會減弱白消安的作用效果。同時，白消安受個體差異、注射手法和位置等因素的影響很難準確判斷到達精原干細胞龕的實際作用濃度，過高會損機體引起動物死亡。

目前，精原干細胞移植受體的制備方法正在被不斷完善，雖然白消安注射法簡單易操作是現階段最常用的受體制備方法，但如何降低血液更新對白消安的代謝以及白消安對機體產生的毒害作用亟待解決。因此，建立一種簡單易操作、高效且基本無副作用的精原干細胞移植受體方法至關重要。

雖然目前已有許多化合物如白消安、雙酚A和奧美拉唑等能夠用于抑制內源性生殖細胞，但在制備精原干細胞移植受體方面仍然有許多缺陷，并不能成功制備精原干細胞移植受體。本發明經過大量的研究，意外發現，通過睪丸注射苯扎氯銨的方法成功制備了精原干細胞移植受體，而且所述苯扎氯銨為FDA批準的無毒藥物，具有良好的安全性，為建立簡單易操作、高效且低副作用的精原干細胞移植受體提供了一種新思路。

發明內容

針對現有技術中的不足，本發明提供了一種簡單易操作、高效且基本無副作用的精原干細胞移植受體方法，具體包括以下內容：

第一方面，本發明提供一種苯扎氯銨用于制備精原干細胞移植受體的新用途。

優選地，將所述苯扎氯銨注射于受體睪丸得到精原干細胞移植受體。

優選地，所述受體為家畜。

優選地，所述受體為羊。

第二方面，本發明提供了一種苯扎氯銨在制備用于制備精原干細胞移植受體的試劑中的應用。

優選地，所述受體為家畜。

優選地，所述受體為羊。

第三方面，本發明提供了一種精原干細胞移植受體的制備方法，所述方法為：苯扎氯銨溶液注射于受體睪丸得到精原干細胞移植受體。