[發明專利]提高菌株抗逆性的方法及基因在提高菌株抗逆性中的應用

在審

• 申請號: 202210567854.2
• 申請日: 2022-05-24
• 公開（公告）號: CN114891916A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 李春;秦磊;劉夏
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/81;C12N15/70;C12N15/90;C12N15/31;C12N1/19;C12N1/21;C12R1/865;C12R1/19
• 代理公司: 北京同立鈞成知識產權代理有限公司 11205
• 代理人: 石明;黃健

1.一種提高菌株抗逆性的方法，其特征在于，包括如下步驟：

將具備抗逆性的菌株和不具備抗逆性的菌株在脅迫條件下培養，培養結束后進行轉錄組測序，比較具備抗逆性的菌株和不具備抗逆性的菌株的轉錄組數據，按基因的轉錄水平進行排序，分析得到顯著上調基因；

將所述顯著上調基因轉入目標菌株，得到能夠表達所述顯著上調基因的目標菌株。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述具備抗逆性的菌株為釀酒酵母，所述釀酒酵母保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC No.16831。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述脅迫條件為：將所述菌株在31-42℃下培養，且培養基中葡萄糖的濃度為2-200g/L。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述顯著上調基因為FMP16、YKR075C、DDR2、COA2、UIP4、MCR1、PAI3、SPG1、SIP18中的一種或多種，其中：

基因FMP16具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

基因YKR075C具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；

基因DDR2具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；

基因COA2具有SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；

基因UIP4具有SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列；

基因MCR1具有SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列；

基因PAI3具有SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列；

基因SPG1具有SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列；

基因SIP18具有SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將所述顯著上調基因轉入目標菌株，得到能夠表達所述顯著上調基因的目標菌株，具體包括如下步驟：

將所述顯著上調基因與啟動子、終止子組裝得到表達盒，將組裝成功的表達盒轉化整合到目標菌株的染色體上，通過篩選得到能夠表達所述顯著上調基因的目標菌株，所述目標菌株為釀酒酵母。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將所述顯著上調基因轉入目標菌株，得到能夠表達所述顯著上調基因的目標菌株，具體包括如下步驟：

通過Gibson組裝或酶切將所述顯著上調基因連接到表達質粒中得到重組載體，將所述重組載體轉入目標菌株中，通過篩選得到能夠表達所述顯著上調基因的目標菌株，所述目標菌株為釀酒酵母或大腸桿菌。

7.一種基因在提高菌株抗逆性中的應用，其特征在于，所述基因為FMP16、YKR075C、DDR2、COA2、UIP4、MCR1、PAI3、SPG1、SIP18中的一種或多種，其中：

基因FMP16具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

基因YKR075C具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；

基因DDR2具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；

基因COA2具有SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；

基因UIP4具有SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列；

基因MCR1具有SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列；

基因PAI3具有SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列；

基因SPG1具有SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列；

基因SIP18具有SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列。

8.一種能夠表達權利要求7所述基因的菌株。

9.根據權利要求8所述的菌株，其特征在于，所述菌株為釀酒酵母或大腸桿菌。

10.權利要求8或9所述菌株在工業生產中的應用。