[發明專利]一種RSH過表達基因工程淀粉酶產色鏈霉菌及提高豐加霉素發酵產量的方法有效
| 申請號： | 202210563062.8 | 申請日： | 2022-05-23 |
| 公開（公告）號： | CN114806992B | 公開（公告）日： | 2023-08-22 |
| 發明（設計）人： | 宋陽;申屠旭萍;俞曉平;張祥麗;張子軒 | 申請（專利權）人： | 中國計量大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/54;C12N15/76;C12P19/40;C12R1/525 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務所有限公司 33200 | 代理人： | 鄭海峰 |
| 地址： | 310018 浙江省*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 rsh 表達 基因工程 淀粉酶 產色鏈 霉菌 提高 霉素 發酵 產量 方法 | ||
1.?一種RSH過表達基因工程淀粉酶產色鏈霉菌，其特征在于，其為通過基因工程方法由質粒pIB139和RSH基因構建重組質粒，并轉入淀粉酶產色鏈霉菌Streptomycesdiastatochromogenes?1628中構建得到，所述RSH過表達基因工程淀粉酶產色鏈霉菌過量表達RSH基因，所述RSH基因序列如SEQ?ID?No.1所示。
2.一種如權利要求1所述的RSH過表達基因工程淀粉酶產色鏈霉菌的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)以淀粉酶產色鏈霉菌為模板，PCR擴增獲得含有NdeI和XbaI兩個酶切位點的
2)?用NdeI和XbaI雙酶切質粒pIB139，將擴增的目的基因片段用NdeI和XbaI雙酶切后，與雙酶切質粒pIB139進行連接；得到重組穿梭載體pIB139-RSH；轉入大腸桿菌感受態細胞，篩選轉化子保存；所述質粒pIB139是在pSET152質粒上，在多克隆位點添加紅霉素啟動子PermE*或者其他鏈霉菌內可用啟動子構建獲得；重組穿梭載體pIB139-RSH為大腸桿菌和鏈霉菌穿梭質粒；
3)?重組穿梭載體pIB139-RSH整合到淀粉酶產色鏈霉菌Streptomycesdiastatochromogenes?1628染色體基因組，獲得RSH過表達基因工程淀粉酶產色鏈霉菌。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟1)中，PCR擴增的引物為RSH-F/RSH-D，RSH-F的序列如SEQ?ID?No.2所示，RSH-D的序列如SEQ?ID?No.3所示。
4.一種權利要求1所述的RSH過表達基因工程淀粉酶產色鏈霉菌在生產豐加霉素中的應用。
5.一種淀粉酶產色鏈霉菌高產豐加霉素的方法，其包括如下步驟：
1)將權利要求1所述的RSH過表達基因工程淀粉酶產色鏈霉菌接種在GYM培養基中，在25-37℃培養到產生分生孢子；
2)將孢子接種到GYM培養基培養基中，在25-37℃，150-200rpm，培養24-30小時，將培養好的種子轉接到GYM培養基中發酵直到96h，即可獲得豐加霉素母液。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述GYM培養基的組成為：葡萄糖?4g/L，酵母提取物?4g/L，麥芽糖提取物?4g/L，酪蛋白提取物?1g/L，NaCl?2g/L。
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