[發明專利]一種提高PF1022A發酵產量的方法

在審

• 申請號: 202210560600.8
• 申請日: 2022-05-20
• 公開（公告）號: CN114875093A
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: 徐倩;項仁鑫;楊小虎;方佳雙;陶亮亮;應靈萍;孫鵬;楊志清
• 申請（專利權）人: 浙江海正藥業股份有限公司
• 主分類號: C12P17/14
• 分類號: C12P17/14;C12N1/38;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種提高PF1022A發酵產量的方法，以可產PF1022A的座堅殼菌為生產菌株，在發酵培養基進行有氧發酵，所述發酵培養基中包括可同化碳源，可同化氮源和無機鹽，其中，所述可同化碳源中含有固體麥精。本發明所提供的技術方案簡單易行，提高了PF1022A的生產效率，極大的提高了PF1022A的產量(發酵產量最高可達6000μg/mL以上)，降低了生產成本，便于PF1022A大規模工業化生產。

技術領域

本發明涉及工業微生物發酵技術領域，具體涉及一種提高PF1022A發酵產量的方法。

背景技術

艾默德斯(Emodepside)是一種以PF1022A為前體的半合成衍生物，對無脊柱動物(如線蟲、蛔蟲)等有殺傷作用，拜爾動物保健公司已研制出Emodepside分別與吡喹酮(Profender)及妥曲珠利(Procox)的組合物用于貓和狗的驅腸蟲藥，Profender(與吡喹酮聯用)已于2007年在美國上市。拜耳公司與DNDi合作開發Emodepside，用于治療盤尾絲蟲病引起的“河盲癥”(人用藥)，2016年進入健康志愿者1期試驗，2017年完成了單次遞增劑量研究，2018年底完成了多次遞增劑量研究。

PF1022A作為合成艾默德斯的前體原料，市場前景非常廣闊，備受關注。目前，PF1022A合成有固相合成法和生物合成方法。固相合成法步驟繁瑣及工藝復雜，不適合大規模生產。而關于PF1022A發酵生產報道比較少，PF1022A的產量又比較低。針對此現狀，我公司選育出一株全新的PF1022A產生菌，具體公開在CN201711276671.0，該菌株具備生產能力高、遺產穩定性高等優勢，但其公開的發酵方法仍然存在發酵產量不夠高、發酵成本高等問題，不利于大規模工業化生產。

發明內容

本發明提供了一種提高PF1022A發酵產量的方法，以可產PF1022A的座堅殼菌為生產菌株，在發酵培養基中進行有氧發酵，所述發酵培養基中包括可同化碳源，可同化氮源和無機鹽，其中，所述可同化碳源中含有固體麥精。

在優選的實施方案中，所述固體麥精在發酵培養基中的含量為70-200g/L，進一步優選為100-200g/L，更優選為140-200g/L，最優選160g/L。

在優選的實施方案中，所述可同化的碳源進一步含有選自葡萄糖、麥芽糊精、麥芽糖、大豆油、可溶性淀粉、玉米淀粉之一或上述任何兩種或多種物質的組合。

在優選的實施方案中，所述可同化的碳源進一步含有大豆油和麥芽糊精，優選為大豆油。

在優選的實施方案中，所述可同化的氮源選自酵母粉、棉籽餅粉、小麥胚芽粉、酵母提取粉、黃豆餅粉、花生餅粉之一或上述任何兩種或多種物質的組合。

在優選的實施方案中，所述可同化的氮源為酵母粉和棉籽餅粉的組合。

在優選的實施方案中，所述無機鹽選自硫酸鋅、硫酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸銅、硫酸錳、硫酸氫二銨、氯化鉀、氯化鈉、氯化鎂、氯化鎳、碳酸鈣、氯化鈣之一或任何兩種或多種物質的組合。

在優選的實施方案中，所述無機鹽為碳酸鈣、氯化鈉和硫酸鎂的組合。

在優選的實施方案中，所述發酵培養基包含：75-210g/L可同化的碳源，15-40g/L可同化的氮源，6-10g/L無機鹽；優選的，所述發酵培養基包含：105-210g/L可同化的碳源，15-40g/L可同化的氮源，6-10g/L無機鹽；進一步優選的，所述發酵培養基包含：145-200g/L可同化的碳源，15-40g/L可同化的氮源，6-10g/L無機鹽。

在優選的實施方案中，所述發酵培養基包含：固體麥精，大豆油，棉籽餅粉，酵母粉，氯化鈉，硫酸鎂和碳酸鈣。

在優選的實施方案中，所述發酵培養基中大豆油為5-10g/L；酵母粉為5-10g/L；棉籽餅粉為10-30g/L；氯化鈉為2-3g/L；硫酸鎂為2-3g/L；碳酸鈣為2-4g/L。