[發(fā)明專利]一種用于膀胱癌外泌體多元分析的磁性Janus微載體的制備方法及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210549785.2
• 申請(qǐng)日: 2022-05-20
• 公開（公告）號(hào): CN114720683A
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙遠(yuǎn)錦;魏曉巍;張大淦;卞非卡;陳涵旭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京鼓樓醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/535
• 分類號(hào): G01N33/535;G01N33/543;G01N33/574
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 王楠

本發(fā)明提供一種用于膀胱癌外泌體多元分析的磁性Janus微載體的制備方法，包括：將二氧化硅納米粒子分散液與四氧化三鐵納米粒子分散液混合；以混合分散液作為分散相流體，以二甲基氟化硅油作為連續(xù)相流體，通過微流控技術(shù)制備液滴，并在磁場(chǎng)中發(fā)生相分離，得到磁性Janus微載體；將磁性Janus微載體表面修飾探針分子，用以結(jié)合膀胱癌外泌體標(biāo)志物。本發(fā)明集光子晶體的多元編碼及定向磁控效應(yīng)于一體，具有制備重復(fù)性良好，成本低等優(yōu)點(diǎn)；將其應(yīng)用于腫瘤來源外泌體的定量分析，除具有液相芯片所具有的編碼靈活度高與穩(wěn)定性好的普遍優(yōu)勢(shì)之外，靈敏度高、特異性好的編碼及檢測(cè)性能亦是該微載體重要的應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于膀胱癌外泌體多元分析的磁性Janus微載體的制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，在其診治研究中，經(jīng)典的檢查項(xiàng)目有其自身的優(yōu)點(diǎn)，亦存在明顯的缺點(diǎn)。因此，可靠的檢測(cè)方案值得被我們積極探索。尿液外泌體由泌尿系統(tǒng)中各種細(xì)胞分泌的胞外囊泡釋放至尿液中，并攜帶與其來源細(xì)胞相關(guān)的蛋白質(zhì)、脂類、DNA、mRNA和miRNA。這些遺傳信息能夠反映細(xì)胞的信號(hào)變化，在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程中起著重要的調(diào)控作用，是重要的膀胱腫瘤標(biāo)志物。

目前，實(shí)驗(yàn)室外泌體分離法主要基于其非特異性的理化性質(zhì)，如粒徑、密度、表面電荷，實(shí)驗(yàn)操作步驟繁瑣、特異性差，在一定程度上影響外泌體的回收率和純度。免疫捕獲技術(shù)被認(rèn)為是迄今唯一可用于特異性外泌體捕獲或的技術(shù)，尚存在單次檢測(cè)僅針對(duì)單個(gè)生物標(biāo)志物的問題，且檢測(cè)成本高，通量低，難以滿足臨床診療的需求。基于此，本發(fā)明提出一種用于膀胱癌外泌體多元分析的磁性Janus微載體的制備方法及應(yīng)用以解決上述問題。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于膀胱癌外泌體多元分析的磁性Janus微載體的制備方法及應(yīng)用，所得到的磁性Janus微載體具有編碼穩(wěn)定、高通量、高靈敏度及特異性良好的優(yōu)點(diǎn)，集合了光子晶體的多元編碼效應(yīng)與磁控效應(yīng)，雙向提升了檢測(cè)平臺(tái)的性能，實(shí)現(xiàn)膀胱癌外泌體的多元分析。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種用于膀胱癌外泌體多元分析的磁性Janus微載體的制備方法，包括以下步驟：

S1、將二氧化硅納米粒子分散液與四氧化三鐵納米粒子分散液混合，經(jīng)過振蕩混勻和超聲分散，配制為混合分散液；

S2、以混合分散液作為分散相流體，以二甲基氟化硅油作為連續(xù)相流體，通過微流控技術(shù)制備液滴，將生成的液滴收集于甲基硅氧烷油中，隨后將液滴置于磁場(chǎng)中發(fā)生相分離，得到磁性Janus微載體；四氧化三鐵粒子沉積使微載體下部呈現(xiàn)黑色，微載體上部為二氧化硅粒子隨溶劑蒸發(fā)而自組裝形成的周期性有序結(jié)構(gòu)；

S3、將S2所制備的磁性Janus微載體表面修飾探針分子，基于雙抗體夾心原理，用于膀胱癌外泌體的編碼分析。

進(jìn)一步的，S1中，二氧化硅納米粒子分散液中，二氧化硅納米粒子的濃度為20wt％～40wt％；四氧化三鐵納米粒子分散液中，四氧化三鐵納米粒子的濃度為20wt％～40wt％。

進(jìn)一步的，二氧化硅納米粒子分散液與四氧化三鐵納米粒子分散液混合體積比為1：1。

進(jìn)一步的，S1中，所述二氧化硅納米粒子分散液中，二氧化硅納米粒子的粒徑為226nm，237nm、247nm中的一種，不同粒徑的納米粒子具有不同的反射峰波長而作為多元編碼元素。

進(jìn)一步的，S2中，所述二甲基氟化硅油粘度為50cSt，甲基硅氧烷油粘度為500cSt。

進(jìn)一步的，S3中，磁性Janus微載體表面修飾探針分子的方法為：將磁性Janus微載體進(jìn)行APTES氨基化、琥珀酸酐羧化反應(yīng)，在MES緩沖液(pH＝5.9)中，經(jīng)NHS、EDC活化酰胺反應(yīng)，將探針偶聯(lián)至微載體表面，其中，探針的濃度為0.01mg/mL。