[發明專利]一種新型冠狀病毒的檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 202210532626.1
• 申請日: 2022-05-10
• 公開（公告）號: CN114764100A
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 金涌;陳艷;鄒明強;薛強;殷宏
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/531;B22F1/00;B22F9/24;B82Y30/00;B82Y40/00
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 孫光遠

本發明公開了一種新型冠狀病毒的檢測試劑盒及其制備方法。屬于醫學檢驗技術領域。包括檢測新冠病毒的免疫層析表面增強拉曼光譜試紙條和樣品提取液，試紙條具體包括均勻包被在結合墊的Wu?DTNB@Ag?Ab1溶液、包被在硝酸纖維素膜上構成檢測線的新冠N蛋白抗體2、包被在硝酸纖維素膜上構成質控線的兔抗鼠IgG。本發明的試紙條，包括樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊和PVC背襯，在PVC背襯上依次連續粘附有樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。具有特異性強，靈敏度高，檢測時間短，可現場操作，檢測成本低，操作簡便等優點。

技術領域

本發明涉及醫學檢驗技術領域，更具體的說是涉及一種新型冠狀病毒的檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

核酸檢測作為確診方法，在患者臨床診斷和疑似患者排查中發揮了重要作用。但是，受操作繁瑣、耗時長、需要集中送檢等限制，使得疑似患者不能及時得到診斷和分流處置，并且檢測還具有假陰性缺陷。

免疫檢測是通過抗體抗原之間的特異性反應原理，通過檢測體內病毒蛋白(抗原)、或者體內特異性針對病毒蛋白的抗體，對感染做出檢測，廣泛應用于艾滋病病毒、乙型肝炎、丙型肝炎等重大傳染病的檢測。

新型冠狀病毒檢測是通過新冠病毒和新冠抗體特異性結合，實現檢測功能。特點是快速出結果，操作簡便，是新冠肺炎診斷特別是初篩和排查的重要檢測手段。在使用現場快速檢測產品，快速篩查疑似患者和密切接觸人群，對于快速控制傳播意義重大。

然而，雖然免疫檢測成為新冠狀病毒確診篩查的輔助檢測手段，但靈敏度低是其最大短板。

因此，如何提供一種新型冠狀病毒的檢測試劑盒，克服上述技術缺陷，是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種新型冠狀病毒的檢測試劑盒及其制備方法。比常規膠體金層析試劑檢測靈敏度提高一個數量級以上，解決了免疫檢測靈敏度低的瓶頸性技術難題，彌補了免疫診斷產品原有的先天性不足，適合基層醫療機構、公共衛生應急監測場所用于快速篩查診斷。

具體將表面增強拉曼光譜(SERS)與免疫分析技術進行結合，建立SERS 免疫層析檢測技術，不僅具有SERS的高靈敏性和光譜可區分性，還具有免疫分析的高特異性和便捷性。利用鎢包銀核殼結構作為SERS基底，既具有鎢納米粒子的穩定性，又具有銀納米粒子的拉曼增強效果。在鎢銀核殼表面修飾拉曼信號分子DTNB和COVID-19抗體，將表面增強拉曼光譜技術與免疫層析技術相結合，開發了一種超靈敏的COVID-19表面增強拉曼光譜免疫層析檢測新方法。

其中，試紙條采用雙抗體夾心法來檢測待測樣品中是否含有新型冠狀病毒。檢測陽性樣品時，樣品中的新型冠狀病毒與拉曼免疫探針 (Wu-DTNB@Ag-Ab1)上所連接的新型冠狀病毒抗體1結合，該復合物通過層析作用在硝酸纖維素膜內部向前移動，經過檢測區時與包被的新型冠狀病毒抗體2結合，形成拉曼免疫探針-新型冠狀病毒抗體1-新型冠狀病毒-新型冠狀病毒抗體2復合物，因此T線將出現條帶，結果為陽性；檢測陰性樣品時，樣本中不含新冠抗原，無法形成上述免疫復合物，則T線不出現條帶，結果為陰性。通過拉曼光譜儀測定T線上的探針信號，測定新冠病毒的含量。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種新型冠狀病毒的檢測試劑盒，包括檢測新冠病毒的免疫層析表面增強拉曼光譜試紙條和樣品提取液，試紙條包括均勻包被在結合墊的 Wu-DTNB@Ag-Ab1溶液、包被在硝酸纖維素膜上構成檢測線的新冠N蛋白抗體2、包被在硝酸纖維素膜上構成質控線的兔抗鼠IgG；Wu-DTNB@Ag-Ab1 溶液的制備方法包括以下步驟：

(1)用檸檬酸三鈉與硝酸銀反應制備納米銀顆粒溶液；

(2)向步驟(1)制備的納米銀顆粒溶液中加入拉曼信號分子DTNB得 AgNPs-DTNB溶液；