[發(fā)明專利]家蠶核型多角體病毒抗性相關(guān)的SNP分子標(biāo)記及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210532617.2
• 申請日: 2022-05-13
• 公開（公告）號: CN114854876A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 呂鵬;張茹松;潘曄;劉曉勇;姚勤;陳克平
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
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1.家蠶核型多角體病毒抗性相關(guān)SNP分子標(biāo)記，其特征在于：所述SNP分子標(biāo)記包括Chr3-746標(biāo)記和Chr27-5071標(biāo)記；所述Chr3-746標(biāo)記位于家蠶p50T基因組的3號染色體序列的第14951064位，堿基多態(tài)性為G/A；所述Chr27-5071標(biāo)記位于家蠶p50T基因組的27號染色體序列的第9462596位，堿基多態(tài)性為C/G。

2.檢測權(quán)利要求1所述SNP分子標(biāo)記的引物，所述引物包括分別用于擴增Chr3-746標(biāo)記和Chr27-5071標(biāo)記的引物組；所述用于擴增Chr3-746標(biāo)記的引物組包括SEQ.ID.NO.1-3所示引物序列，用于擴增Chr27-5071標(biāo)記的引物組包括SEQ.ID.NO.4-6所示引物序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的引物，其特征在于，所述用于擴增Chr3-746標(biāo)記的引物組中SEQ.ID.NO.1所示引物用于匹配A等位基因，SEQ.ID.NO.2所示引物用于匹配G等位基因；所述用于擴增Chr27-5071標(biāo)記的引物組中SEQ.ID.NO.4所示引物用于匹配G等位基因，SEQ.ID.NO.5所示引物用于匹配C等位基因。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的引物，其特征在于，所述用于擴增Chr3-746標(biāo)記的引物組中SEQ.ID.NO.1所示引物和用于擴增Chr27-5071標(biāo)記的引物組中SEQ.ID.NO.4所示引物采用HEX或VIC熒光探針分別標(biāo)記；用于擴增Chr3-746標(biāo)記的引物組中SEQ.ID.NO.2所示引物和用于擴增Chr27-5071標(biāo)記的引物組中SEQ.ID.NO.5所示引物采用FAM熒光探針分別標(biāo)記。

5.檢測或輔助檢測家蠶BmNPV抗性的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包括權(quán)利要求1所述分子標(biāo)記或權(quán)利要求2-4任一項所述的引物；所述產(chǎn)品包括檢測試劑、試劑盒或芯片。

6.權(quán)利要求1所述的SNP分子標(biāo)記或權(quán)利要求2-4任一項所述的引物或權(quán)利要求5所述的產(chǎn)品在以下任一方面的應(yīng)用：

(1)用于家蠶種質(zhì)資源或者品種的鑒定；

(2)用于家蠶BmNPV病抗性品種純度的鑒定；

(3)用于家蠶的BmNPV病抗性性狀的鑒定；

(4)用于家蠶的分子標(biāo)記輔助育種；

(5)用于家蠶的BmNPV病抗性基因的定位與鑒定；

(6)用于制備檢測家蠶BmNPV病抗性或性狀鑒定的產(chǎn)品。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，包括如下步驟：提取待測家蠶樣品的基因組DNA；對提取的基因組DNA進(jìn)行Chr3-746標(biāo)記和Chr27-5071標(biāo)記的基因多態(tài)性或基因型的檢測；根據(jù)檢測結(jié)果進(jìn)行判斷、鑒定或輔助育種。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測結(jié)果的判斷、鑒定或輔助育種方法為：若Chr3-746標(biāo)記的基因型為GG或Chr27-5071標(biāo)記的基因型為CC，則待檢家蠶為BmNPV病感病家蠶；若Chr3-746標(biāo)記的基因型為AA或AG且Chr27-5071標(biāo)記的基因型為GG或GC，則待檢家蠶為BmNPV病抗病家蠶。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，采用KASP技術(shù)檢測基因多態(tài)性或基因型，所述KASP技術(shù)的PCR擴增體系以5μL計為：2.5μL KASP Master Mix(2x)，0.7μL KASP引物組(10μM濃度的F1、F2引物各0.15μL，10μM濃度的R引物0.4μL)，1μL基因組DNA(20～50ng/μL)，加ddH₂O補充體系至5μL。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述KASP技術(shù)的PCR擴增程序為：94℃預(yù)變性10min；94℃變性20s，65℃退火1min，每個循環(huán)退火溫度降0.8℃，共10個循環(huán)；94℃變性20s，57℃退火1min，共27～30個循環(huán)；25℃延伸30s，收集熒光信號。