[發明專利]云南牛蛭線粒體全基因組序列的擴增引物及方法

在審

• 申請號: 202210531128.5
• 申請日: 2022-05-16
• 公開（公告）號: CN115029447A
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 孟凡明;羅藝菲;劉子超;張磊
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京盛詢知識產權代理有限公司 11901
• 代理人: 方亞兵

1.一種云南牛蛭線粒體全基因組序列的擴增引物，其特征在于，包括如下14對對引物對：

(1)第1對引物為如SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物；(2)第2對引物為如SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物；(3)第3對引物為如SEQ ID NO.5所示的上游引物和SEQ ID NO.6所示的下游引物；(4)第4對引物為如SEQ ID NO.7所示的上游引物和SEQ ID NO.8所示的下游引物；(5)第5對引物為如SEQ IDNO.9所示的上游引物和SEQ ID NO.10所示的下游引物；(6)第6對引物為如SEQ ID NO.11所示的上游引物和SEQ ID NO.12所示的下游引物；(7)第7對引物為如SEQ ID NO.13所示的上游引物和SEQ ID NO.14所示的下游引物；(8)第8對引物為如SEQ ID NO.15所示的上游引物和SEQ ID NO.16所示的下游引物；(9)第9對引物為如SEQ ID NO.17所示的上游引物和SEQID NO.18所示的下游引物；(10)第10對引物為如SEQ ID NO.19所示的上游引物和SEQ IDNO.20所示的下游引物；(11)第11對引物為如SEQ ID NO.21所示的上游引物和SEQ IDNO.22所示的下游引物；(12)第12對引物為如SEQ ID NO.23所示的上游引物和SEQ IDNO.24所示的下游引物；(13)第13對引物為如SEQ ID NO.25所示的上游引物和SEQ IDNO.26所示的下游引物；(14)第14對引物為如SEQ ID NO.27所示的上游引物和SEQ IDNO.28所示的下游引物。

2.如權利要求1所述的擴增引物在云南牛蛭線粒體全基因組序列擴增中的應用。

3.一種利用如權利要求1所述的擴增引物擴增云南牛蛭線粒體全基因組序列的方法，其特征在于，包括以提取的云南牛蛭基因組DNA為模板，利用所述的擴增引物進行PCR擴增，所得擴增產物進行瓊脂糖電泳檢測、測序。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，擴增反應體系包括：DNA模板60ng、0.2-1.0μM引物各1.5μL，2.5mM dNTP 8μL、10×PCR Buffer 5μL、2.0mM MgCl₂ 1μL、Tap酶0.5μL，余量用無核酸酶水補齊50μL。

5.如權利要求3所述的方法，其特征在于，擴增程序為：94℃預變性2min，94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸60s，共35個循環，最后72℃延伸10min。

6.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述擴增產物的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示。

7.一種擴增云南牛蛭線粒體全基因組序列的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的擴增引物。