[發(fā)明專利]一株分泌抗丙炔氟草胺單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210530428.1
• 申請日: 2022-05-16
• 公開（公告）號: CN114774368B
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胥傳來;王鵬;匡華;徐麗廣;孫茂忠;劉麗強(qiáng);吳曉玲;宋珊珊;胡擁明;郝昌龍;吳愛紅;郭玲玲;胥欣欣;倪萍;畢雪威
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué);無錫杰圣杰康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577;G01N33/53;C12R1/91
• 代理公司: 蘇州市中南偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32257
• 代理人: 楊慧林

本發(fā)明提供了一株分泌抗丙炔氟草胺單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用，屬于食品安全免疫檢測領(lǐng)域。本發(fā)明分泌抗丙炔氟草胺單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCCNo.22334。本發(fā)明獲得的抗丙炔氟草胺單克隆抗體細(xì)胞株可用于食品安全檢測中丙炔氟草胺殘留分析檢測，其對丙炔氟草胺有較好的檢測靈敏度和特異性(ICsubgt;50/subgt;值為0.59ng/mL)。本發(fā)明成果可用制備丙炔氟草胺的免疫檢測試劑盒，為谷物、油料、蔬菜、水果、調(diào)味料以及生乳中丙炔氟草胺殘留量的檢測提供有力的檢測方法與手段。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品中農(nóng)藥殘留的快速檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一株分泌抗丙炔氟草胺單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

丙炔氟草胺(flumioxazin，簡稱FLU)，商品名Sumisoya、速收，是日本住友化學(xué)工業(yè)株式會社開發(fā)的環(huán)酰亞胺類除草劑。丙炔氟草胺為原卟啉原氧化酶抑制劑，是觸殺型選擇性除草劑，使用后會在土壤表面形成處理層，雜草幼苗接觸后會引起植物體內(nèi)的原卟啉積累，使細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化作用增強(qiáng)，從而導(dǎo)致敏感雜草的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與細(xì)胞功能產(chǎn)生不可逆損害，在24～48h內(nèi)敏感雜草幼苗就會由凋萎、白化到壞死及枯死。其目前已在多個國家上市，主要用來防除大豆、棉花、葡萄和其他許多作物田中的闊葉雜草。

測定丙炔氟草胺含量的分析方法目前研究較少，主要有氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)和高效液相色譜法(HPLC-UV)等儀器方法，這些檢測方法具有耗時、步驟繁瑣、無法進(jìn)行現(xiàn)場快速檢測、成本高等缺點(diǎn)，因此建立快速簡便的丙炔氟草胺檢測方法具有重要意義。酶聯(lián)免疫法(ELISA)是一種極為高效、敏感、快速的檢測方法，適用于大量樣本的現(xiàn)場快速檢測，為丙炔氟草胺檢測提供了一種新的檢測途徑。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一株分泌抗丙炔氟草胺單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用。

本發(fā)明的第一個目的在于提供一株分泌抗丙炔氟草胺單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，所述雜交瘤細(xì)胞株于2021年05月13日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編號CGMCC?No.22334，所述雜交瘤細(xì)胞株分類命名為單克隆細(xì)胞株。

本發(fā)明的第二個目的在于提供一種分泌抗丙炔氟草胺單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株的制備方法，包括以下步驟：

S1：取雜環(huán)酮、硫羧酸溶于有機(jī)溶劑中，并加入碳酸鉀，加熱回流反應(yīng)，待反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液分離純化得到丙炔氟草胺半抗原FLU-COOH；

S2：利用S1中所述丙炔氟草胺半抗原制備丙炔氟草胺完全抗原，將丙炔氟草胺完全抗原與完全弗氏佐劑制備得到免疫原1，所得丙炔氟草胺完全抗原和不完全弗氏佐劑乳化得到免疫原2；

S3：將S2中所得免疫原1對小鼠進(jìn)行皮下免疫；

S4：將S3中免疫后的小鼠使用S2中免疫原2再進(jìn)行加強(qiáng)免疫，并使用丙炔氟草胺完全抗原進(jìn)行沖刺免疫；

S5：取S4中沖刺免疫后的小鼠的脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞融合，得到所述雜交瘤細(xì)胞株。

在本發(fā)明的一個實(shí)施例中，S1中所述雜環(huán)酮的結(jié)構(gòu)式為：

其中

在本發(fā)明的一個實(shí)施例中，S1中所述硫羧酸如式(1)-式(2)所示：

其中n＝1-6。

在本發(fā)明的一個實(shí)施例中，S1中所述丙炔氟草胺與硫羧酸的質(zhì)量之比為1:0.8-3。

在本發(fā)明的一個實(shí)施例中，S1中所述有機(jī)溶劑為DMSO、乙二醇和DMF中的一種或多種。